【用途】
用來檢測(cè)雞血清中的禽腦脊髓炎病毒（AEV）抗體
【試驗(yàn)原理】
禽腦脊髓炎，也稱雛雞傳染性顫搐病，主要通過雞蛋傳播，感染雞和易感雞或成年禽之間亦可發(fā)生水平傳播。青年雞（1~4周齡）主要臨床表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、麻痹或頭頸快速震顫等癥狀，成年雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋能力下降。血清中的病毒抗體可通過酶聯(lián)免疫的方法檢測(cè)。血清中的AEV抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用ELISA方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
將滅活的AEV抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育，血清中的抗AEV抗體將與包被在微孔板上的AEV結(jié)合，形成AEV抗原-抗體復(fù)合物。然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞IgG的酶標(biāo)結(jié)合物至微孔板中，酶標(biāo)物將與AEV抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應(yīng)并生成一種有顏色的產(chǎn)物，zui后終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測(cè)定。
【一個(gè)微孔板所需的試劑的量】
| 抗原包被微孔板 | 12×8條（板） |
| 樣品稀釋液（1×） | 120ml |
| 洗滌液（1×） | 500ml |
| 陽性對(duì)照 | 2μl |
| 陰性對(duì)照 | 2μl |
| 結(jié)合物 | 12ml |
| 底物液 | 12ml |
| 終止液 | 12ml |
【所需物品】
1. 能夠吸取2μl、100μl和800μl的精確移液器
2. zui大吸取100μl的多通道移液器
3. 計(jì)時(shí)器
4. 量筒
5. 蒸餾水
6. 洗板機(jī)
7. 稀釋用容器
8. 能夠讀雙波（405-410nm和630-650nm）的酶標(biāo)儀，OD值讀數(shù)zui大可達(dá)到3.0
【樣品收集】
采集至少0.5ml全血，分離血清并放在冰箱里，2-7℃用于短期儲(chǔ)存，如果*儲(chǔ)存，應(yīng)冷凍，且避免反復(fù)凍溶。如果樣品含有可見的顆粒物質(zhì)，應(yīng)在檢測(cè)之前將其離心除去，嚴(yán)重污染的樣品不允許使用（如高度渾濁、細(xì)菌污染等）
【結(jié)果計(jì)算】
將陽性對(duì)照吸光度值和樣品吸光度值分別減去陰性對(duì)照吸光度值，注意：對(duì)照品及樣品吸光度值都應(yīng)該是2個(gè)重復(fù)孔的平均值。每個(gè)樣品的計(jì)算式如下：
| 樣品平均吸光度值－陰性對(duì)照吸平均吸光度值 | ＝樣品與陽性對(duì)照比值（Sp） |
| 陽性對(duì)照平均吸光度值－陰性對(duì)照平均吸光度值 |
Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU） 陽性對(duì)照值設(shè)為100 EU
【結(jié)果判定及EU單位說明】
AEV ELISA 值 說明
小于15EUs AEV抗體為陰性
15-25 EUs AEV抗體為弱陽性，應(yīng)被認(rèn)為經(jīng)過免疫或暴露于AEV，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs AEV抗體適度陽性
＞75 EUs AEV抗體強(qiáng)陽性
【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調(diào)到100μl，反復(fù)吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對(duì)照、陽性對(duì)照分別加入微孔中，每種做兩個(gè)平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復(fù)洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標(biāo)板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復(fù)步驟7進(jìn)行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標(biāo)儀雙波讀數(shù)（405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長），計(jì)算結(jié)果。
【公司名稱】廣州健侖生物科技有限公司
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說明書下載：http://www.jianlun.com/download/Products/qin/禽呼腸孤抗體檢測(cè)試劑盒-使用說明書.pdf
禽疫病檢測(cè)系列產(chǎn)品（健侖生物榮譽(yù)出品）
| 編碼 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
| 禽病檢測(cè)系列 |
| JL3101 | 雞新城疫抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3102 | 雞新城疫抗原金標(biāo)檢測(cè)卡 | 20T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3103 | 雞新城疫抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 | 20T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3104 | 新城疫血凝及血凝抑制試驗(yàn)抗原 | 2ml | 用于禽新城疫免疫效果的監(jiān)測(cè) |
| JL3105 | 新城疫血凝及血凝抑制試驗(yàn)陽性血清 | 2ml |
| JL3106 | 新城疫病毒RT/盒-PCR檢測(cè)試劑盒 | 10T/盒 | PCR |
| JL3401 | 法氏囊抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3402 | 法氏囊抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 | 40T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3403 | 法氏囊抗原金標(biāo)檢測(cè)卡 | 40T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3107 | 禽腦脊髓炎抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3108 | 禽呼腸孤抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3110 | 鴨禽流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3601 | 雞傳染性喉氣管炎抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3602 | 雞傳染性喉氣管炎抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 | 40T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3701 | 雞減蛋綜合癥EDS76抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3702 | 雞減蛋綜合癥EDS76抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 | 40T/盒 | 金標(biāo)滲濾卡 |
| JL3801 | 雞病毒性關(guān)節(jié)炎抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3010 | 禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3011 | 禽流感抗體檢測(cè)試劑盒 | 96T/盒 | ELISA JL |
| JL3012 | 禽流感抗原金標(biāo)檢測(cè)卡 | 20T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3013 | 禽流感H5抗原金標(biāo)檢測(cè)卡 | 20T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
| JL3014 | 禽流感H9抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 | 20T/盒 | 金標(biāo)層析卡 |
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