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GE常用填料及原理

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GE常用填料及原理

詳細(xì)介紹

一、離子交換層析

  離子交換層析根據(jù)化合物的凈電荷進(jìn)行分離。帶負(fù)電荷或正電荷的官能團(tuán)共價(jià)結(jié)合于固相載體基質(zhì),分別成為陽離子交換劑和陰離子交換劑。當(dāng)一個(gè)帶電荷的分子加入到帶有相反電荷的交換劑時(shí),它就會(huì)被吸附,同時(shí),帶相同電荷的離子和中性分子則被洗脫到層析柱的外水體積里。帶電荷分子的結(jié)合是可逆的,通??捎名}或PH梯度洗脫吸附的分子。

 離子交換層析可以有多種應(yīng)用,包括分離和純化生物分子,分離無機(jī)離子,試劑和水的去離子化,鹽轉(zhuǎn)換以及去除金屬離子、溴化乙錠和SDS。

 兩性化合物的分離策略。如果分子在PH高于其等電點(diǎn)時(shí)穩(wěn)定,可使用陰離子交換樹脂。如果分子在PH低于其等電點(diǎn)時(shí)穩(wěn)定,則使用陽離子交換樹脂。

美國GE(原安瑪西亞)層析填料(常用型號(hào))
離子交換填料: 規(guī)格
17-0510-01QSepharoseF.F 300ml
17-0510-04QSepharoseF.F 5L
17-0510-05QSepharoseF.F 10L
17-0729-01SPSepharoseF.F 300ml
17-0729-04SPSepharoseF.F 5L
17-0729-05SPSepharoseF.F 10L
17-0709-01DEAESepharoseF.F 500ml
17-0709-05DEAESepharoseF.F 10L
17-0719-01CMSepharoseF.F 500ml
17-0719-05CMSepharoseF.F 10L
17-1275-02SOURCE30Q 200ml
17-1275-03SOURCE30Q 1L
17-1014-03QSepharoseH.P. 1L
17-1087-03SPSepharoseH.P. 1L

二、親和層析

  親和層析過程中,配體與待分離分子具有特定的親和力,共價(jià)結(jié)合于固體之上。樣品混合液加入到這些基質(zhì)形成的層析柱載體時(shí),目標(biāo)分子(如蛋白、多肽、DNA片段等)與固定在基質(zhì)上的配體結(jié)合,而混合液中不具親和力的組分則析出。通過改變PH值、濃鹽度、使用有機(jī)溶劑或加入與配體競爭性結(jié)合的分子,則可以將目標(biāo)分子洗脫下來。

美國GE(原安瑪西亞)層析填料(常用型號(hào))
親和層析填料:
17-0575-02ChelatingSepharoseFastFlow 500ml
17-0575-04ChelatingSepharoseFastFlow 5L
17-1279-03rProteinASepharoseFastFlow 200ml
17-1279-04rProteinASepharoseFastFlow 1L
金屬螯合填料:

17-0920-07填料名稱:IMACSepharoseHighPerformance

17-0921-09填料名稱:IMACSepharose6FF

三、分子量排阻層析(又名分子篩層析、凝膠過濾層析)

分子量排阻層析(SEC)又稱凝膠過濾層析,它根據(jù)分子量大小來分離分子。凝膠基質(zhì)由特定大小孔隙的球形小珠組成不同分子量的分子從孔中排阻通過,發(fā)生分離。小分子進(jìn)入孔內(nèi),會(huì)延滯它們通過層析柱,而大分子避開孔,洗脫入層析柱外水體積。因此,樣品根據(jù)分子量大小進(jìn)行分離,并依照分子量遞減順序洗脫。

依據(jù)層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質(zhì)。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團(tuán)分離,包括:

脫鹽-目標(biāo)分子洗脫出來,而小分子保留在凝膠孔內(nèi)。為了獲得理想的分離,基質(zhì)的分子量排阻限度應(yīng)比目標(biāo)分子小。

分級(jí)分離-一定分子量范圍的分子在凝膠基質(zhì)內(nèi)分離。使用這種方法時(shí),目標(biāo)分子應(yīng)當(dāng)在凝膠的分級(jí)分離范圍以內(nèi)。

分子量排阻層析常規(guī)應(yīng)用包括蛋白分級(jí)分離及分子量確定、核酸分離、質(zhì)粒純化和多糖分級(jí)分離。

層析分辨率取決于顆粒大小,孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常,低流速(2-10cm/hr)、細(xì)長柱、小顆粒凝膠、小樣品體積(總床體積的1-5%)、2倍的分子量差異以及相同的溶液粘度,可以獲得分辨率。如果用于脫鹽,様品體積則可達(dá)總床體積的30-40%,并可使用短粗柱。

美國GE(原安瑪西亞)層析填料(常用型號(hào))
凝膠過濾填料:
17-0612-01SephacrylS-100HR 750ml
17-0612-05SephacrylS-100HR 10L
17-0584-01SephacrylS-200HR 750ml
17-0584-05SephacrylS-200HR 10L
17-0149-01Sepharose4FastFlow 1L
17-0149-05Sepharose4FastFlow 10L
17-0033-01SephadexG-25Medium 100g
17-0033-02SephadexG-25Medium 500g
17-1044-01Superdex75prepgrade 150ml
17-1044-02Superdex75prepgrade 1L
17-1043-01Superdex200prepgrade 150ml
17-1043-02Superdex200prepgrade 1L

四、疏水作用層析

疏水作用層析(HIC)根據(jù)化合物的疏水性進(jìn)行分離;帶有疏水和親水基團(tuán)的樣品分子在高鹽緩沖液中加入到HIC層析柱,緩沖液中的鹽降低了樣品的溶解度。由于總?cè)芙舛认陆?,裸露在外的疏水基團(tuán)就被介質(zhì)吸附?;衔锏氖杷栽綇?qiáng),需要加入用來提高結(jié)合力的鹽就越少。通常依照疏水性的遞增次序,用遞減鹽梯度來洗脫層析柱內(nèi)的樣品,也可以在洗脫中加入溫和的有機(jī)調(diào)節(jié)物或洗滌劑來完成。

美國GE(原安瑪西亞)層析填料(常用型號(hào))
疏水層析填料:
17-0980-01ButylSepharose4FastFlow 200ml
17-0946-02OctylSepharose4FastFlow 200ml
17-0965-05PhenylSepharose6FastFlow(lowsub) 200ml
17-0965-03PhenylSepharose6FastFlow(lowsub) 1L
17-0973-05PhenylSepharose6FastFlow(highsub) 200ml
17-0973-03PhenylSepharose6FastFlow(highsub) 1L

五、羥基磷灰石層析

羥基磷灰石(Ca5(PO4)3OH)2是磷酸鈣的一種,對(duì)分離一些其它層析和電泳技術(shù)無法區(qū)分的蛋白具有的選擇性和分辨率。羥基磷灰石層析適應(yīng)從最初捕獲到最完善的任何步驟。應(yīng)用于以下分離和純化:

·不同種類的單克隆和多克隆抗體·區(qū)分超螺旋與線性DNA

·輕鏈組成不同的抗體·區(qū)分雙鏈DNA與單鏈DNA

·抗體片斷·病毒·同工酶

關(guān)鍵詞:層析柱 離子交換樹脂
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