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上海江萊生物科技有限公司

豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa試劑盒使用說明書

時間:2014-3-17閱讀:323
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  Elisakit規(guī)格:48孔配置/96孔配置
  
  標準品稀釋液:1.5ml×1瓶
  
  酶標試劑:3ml×1瓶(48)/6ml×1瓶(96)
  
  【豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用
  
  計算:
  
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
  
  試劑盒組成:
  
  封板膜:2片(48)/2片(96)
  
  說明書:1份
  
  密封袋:1個
  
  標準品:2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
  
  酶標包被板:1×481×962-8℃保存
  
  樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
  
  顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
  
  顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
  
  終止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
  
  濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
  
  實驗原理:
  
  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)水平。用純化的豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(OxLDL),再與HRP標記的氧化低密度脂蛋白(OxLDL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白(OxLDL)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)濃度。
  
  目的:本試劑盒用于測定豬血清,血漿及相關(guān)液體樣本中氧化低密度脂蛋白(OxLDL)的含量。
  
  服務承諾:
  
  供貨期:款到發(fā)貨。
  
  工作時間內(nèi)免費的技術(shù)咨詢和指導。為客戶提供來樣檢測服務,zui大限度實驗結(jié)果的有效性(免費代測)。
  
  保存條件及有效期:
  
  試劑盒保存:2-8℃|有效期:6個月
  
  【豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa試劑盒】樣本處理及要求:
  
  1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
  
  2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
  
  3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
  
  4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  
  5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  
  6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
  
  7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
  
  操作步驟
  
  標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,150ng/L)。
  
  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  
  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  
  配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  
  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  
  加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  
  溫育:操作同3。
  
  洗滌:操作同5。
  
  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  
  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
  
  【豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa試劑盒】注意事項:
  
  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  
  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
  
  各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  
  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  
  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  
  底物請避光保存。
  
  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
  
  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  
  本試劑不同批號組分不得混用。
  
  10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
  
  試劑盒性能:
  
  1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
  
  2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%
  
  檢測范圍:
  
  0.2IU/L-6IU/L
  
  提供各種種屬、各種系列ELISA科研實驗檢測試劑盒。購買本公司任何一種Elisa試劑盒,都可提供代檢測服務,現(xiàn)貨直銷,質(zhì)量有保障,款到當天可發(fā)貨,免費快遞送貨上門。

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