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高多糖/酚植物線粒體 DNA 萃取試劑盒產(chǎn)品說明書
點擊次數(shù)：674 發(fā)布時間：2014-12-10
YIJI 高多糖/酚植物線粒體 DNA 萃取試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
YIJI 高多糖/酚植物線粒體 DNA 萃取試劑是一種旨在通過物理或化學破膜及離心處理方法，從植物細
胞或組織中去除多糖和多酚之后，分離出完整而純化的線粒體細胞器，然后進一步生物酶處理以獲得高質(zhì)
量的線粒體 DNA 的而經(jīng)典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適合于
各種新鮮的含有大量多糖和酚的植物組織，包括葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）、以及培養(yǎng)細胞的線粒體核酸成分的分離。用于后續(xù)的雜交、克隆、酶切、PCR 分析等。產(chǎn)品即到即用，操作簡易，性能
穩(wěn)定，無核酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。
技術背景
線粒體細胞器的研究是現(xiàn)代細胞生物學的zui重要的課題之一。線粒體成為生物衰老、古生物、細胞凋亡、
能量代謝等研究的主要對象。線粒體DNA的分離和定量以及突變分析是研究中*的。
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI 清理液（Reagent A） 毫升
YIJI 裂解液（Reagent B） 毫升
YIJI 凈化液（Reagent C） 毫升
YIJI 強化液（Reagent D） 毫升
YIJI 保存液（Reagent E） 毫升
YIJI 破膜液（Reagent F） 微升
YIJI 酶解液（Reagent G） 微升
YIJI 去干擾液（Reagent H） 毫升
YIJI 萃取液（Reagent I） 毫升
YIJI 濃縮液（Reagent J） 微升
YIJI 助沉液（Reagent K） 毫升
YIJI 沉淀液（Reagent L） 毫升
YIJI 純化液（Reagent M） 毫升
YIJI 緩沖液（Reagent N） 1份
產(chǎn)品說明書
保存方式
保存 YIJI 凈化液（Reagent C）YIJI 酶解液、（Reagent G）YIJI 萃取液、（Reagent I） YIJI和
助沉液（Reagent K）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保證 6 月
用戶自備
15 毫升錐形離心管：用于線粒體初步制備物的存放
50 毫升錐形離心管：用于細胞或組織收集后離心或清洗
1.5 毫升離心管：用于保存線粒體
4℃臺式離心機：用于沉淀細胞
4℃超速離心機：用于分離細胞器成分
微型臺式離心機：用于沉淀核酸
DOUNCE 勻漿器：用于裂解細胞
58℃恒溫水槽：用于孵育反應物
渦旋震蕩儀：用于混勻
實驗步驟
一、 植物組織線粒體 DNA 分離（物理法）
實驗開始前，將試劑盒里的 YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出 xx 毫升 YIJI 凈化液
（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為
YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
1． 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定組織重量
2． （選擇步驟）放進預冷的 50 毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入適量的（1 克組織需要 10 毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗 1 次
4． 即刻用刀片切碎組織
5． 放進一個預冷的 15 毫升錐形離心管
6． 加入預冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液
7． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
8． 即刻放進預冷的 DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）（注意：參見注意事項 7）
9． 將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管，放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1500g
10．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管（如果上清液含有
肉眼可見的殘渣，重復離心 5 分鐘一次，速度為 3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核
和未溶解的細胞以及完整質(zhì)體等殘渣
11．放進 4℃超速離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g
12．小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放
進－70℃冰箱里）
13．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
14．渦旋震蕩 15 秒，混勻顆粒群
15．轉(zhuǎn)入 1.5 毫升離心管
16．置入冰槽中孵育 15 分鐘（注意：參見注意事項 12）
17．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）
18．加入 xx 微升 YIJI 去干擾液（Reagent H）
19．用 200 微升槍頭上下抽吸混勻
20．放進微型臺式離心機瞬時離心 5 秒鐘，速度為 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
21．放進 58℃恒溫水槽孵育 2 小時（注意：可以孵育 4 至 16 小時，增加萃取產(chǎn)量；參見注意事項 12）
22．置于室溫下冷卻 15 分鐘，直至處于室溫狀態(tài)（或置于冰槽里 15 至 30 秒）
23．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
24．渦旋震蕩 5 秒
25．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
26．移出上層液相溶液到新的 1.5 毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
27．加入 xx 微升 YIJI 濃縮液（Reagent J）到新的離心管
28．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）
29．加 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）
30．在渦旋震蕩儀上震蕩 5 秒，充分混勻
31．放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：離
心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
32．小心抽掉上清液
33．加入 xx 毫升 YIJI 純化液（Reagent M）
34．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
35．小心抽掉上清液
36．空氣中晾干沉淀顆粒群
37．加入 xx 微升 YIJI 緩沖液（Reagent N）
38．溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出 2 微升進行 PCR 反應
二、 植物組織線粒體 DNA 分離（化學法）
實驗開始前，將試劑盒里的 YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出 xx 毫升 YIJI 凈化液
（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為
YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
1． 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定組織重量
2． （選擇步驟）放進預冷的 50 毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入適量的（1 克組織需要 xx 毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗 1 次
4． 移入一個液氮凍存管
5． 即刻放進液氮罐過夜
6． 次日從液氮罐里取出，即刻（zui快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
7． 放進一個 15 毫升錐形離心管
8． 加入預冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液
9． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
10．在冰槽里孵育 2 分鐘，期間渦旋震蕩 5 秒一次
11．加入預冷的 xx 微升 YIJI 強化液（Reagent D）
12．渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
13．在冰槽里孵育 5 分鐘，期間渦旋震蕩 5 秒二次（注意：參見注意事項 8）
14．加入預冷的 xx 毫升 YIJI 保存液（Reagent E），輕輕搖動試管混勻
15．放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1500g
16．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管（如果上清液含有
肉眼可見的殘渣，重復離心 5 分鐘一次，速度為 3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核
和未溶解的細胞以及完整質(zhì)體等殘渣
17．放進 4℃超速離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g
18．小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放
進－70℃冰箱里）
19．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
20．渦旋震蕩 15 秒，混勻顆粒群
21．轉(zhuǎn)入 1.5 毫升離心管
22．置入冰槽中孵育 15 分鐘（注意：參見注意事項 12）
23．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）
24．加入 xx 微升 YIJI 去干擾液（Reagent H）
25．用 xx 微升槍頭上下抽吸混勻
26．放進微型臺式離心機瞬時離心 5 秒鐘，速度為 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
27．放進 58℃恒溫水槽孵育 2 小時（注意：可以孵育 4 至 16 小時，增加萃取產(chǎn)量；參見注意事項 12）
28．置于室溫下冷卻 15 分鐘，直至處于室溫狀態(tài)（或置于冰槽里 15 至 30 秒）
29．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
30．渦旋震蕩 5 秒
31．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
32．移出上層液相溶液到新的 1.5 毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
33．加入 xx 微升 YIJI 濃縮液（Reagent J）到新的離心管
34．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）
35．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）
36．在渦旋震蕩儀上震蕩 5 秒，充分混勻
37．放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：離
心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
38．小心抽掉上清液
39．加入 xx 毫升 YIJI 純化液（Reagent M）
40．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
41．小心抽掉上清液
42．空氣中晾干沉淀顆粒群
43．加入 xx 微升 YIJI 緩沖液（Reagent N）
44．溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出 2 微升進行 PCR 反應
三、 植物細胞或原生質(zhì)體線粒體 DNA 分離（物理法）
實驗開始前，將試劑盒里的 YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出 xx 毫升 YIJI 凈化液
（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為
YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
1． 準備 5 X 107植物細胞或原生質(zhì)體
2． 移入一個 50 毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 200g
4． 小心抽去上清液
5． 加入 xx 毫升預冷的 YIJI 清理液（Reagent A），混勻細胞
6． 放進臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 300g
7． 小心抽去上清液
8． 加入預冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液
9． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻細胞顆粒群
10．即刻放進預冷的 DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化細胞（約 80 下）（注意：參見注意事項 7）
11．將所有細胞勻漿物移入 15 毫升錐形離心管，放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1500g
12．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管（如果上清液含有
肉眼可見的殘渣，重復離心 5 分鐘一次，速度為 3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核
和未溶解的細胞以及完整質(zhì)體等殘渣
13．放進 4℃超速離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g
14．小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放
進－70℃冰箱里）
15．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
16．渦旋震蕩 15 秒，混勻顆粒群
17．轉(zhuǎn)入 1.5 毫升離心管
18．置入冰槽中孵育 15 分鐘（注意：參見注意事項 12）
19．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）
20．加入 xx 微升 YIJI 去干擾液（Reagent H）
21．用 200 微升槍頭上下抽吸混勻
22．放進微型臺式離心機瞬時離心 5 秒鐘，速度為 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
23．放進 58℃恒溫水槽孵育 2 小時（注意：可以孵育 4 至 16 小時，增加萃取產(chǎn)量；參見注意事項 12）
24．置于室溫下冷卻 15 分鐘，直至處于室溫狀態(tài)（或置于冰槽里 15 至 30 秒）
25．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
26．渦旋震蕩 5 秒
27．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
28．移出上層液相溶液到新的 1.5 毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
29．加入 xx 微升 YIJI 濃縮液（Reagent J）到新的離心管
30．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）
31．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）
32．在渦旋震蕩儀上震蕩 5 秒，充分混勻
33．放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：離
心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
34．小心抽掉上清液
35．加入 xx 毫升 YIJI 純化液（Reagent M）
36．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
37．小心抽掉上清液
38．空氣中晾干沉淀顆粒群
39．加入 xx 微升 YIJI 緩沖液（Reagent N）
40．溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出 2 微升進行 PCR 反應
四、 植物細胞或原生質(zhì)體線粒體 DNA 分離（化學法）
實驗開始前，將試劑盒里的 YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出 xx 毫升 YIJI 凈化液
（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為
YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。
1． 準備 5 X 107植物細胞或原生質(zhì)體
2． 移入一個 50 毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 200g
4． 小心抽去上清液
5． 加入 xx 毫升預冷的 YIJI 清理液（Reagent A），混勻細胞
6． 放進臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 300g
7． 小心抽去上清液
8． 加入預冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液
9． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
10．（選擇步驟）超聲波處理 1 分鐘
11．在冰槽里孵育 2 分鐘，期間渦旋震蕩 5 秒一次
12．加入預冷的 xx 微升 YIJI 強化液（Reagent D）
13．渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
14．在冰槽里孵育 5 分鐘，期間渦旋震蕩 5 秒二次（注意：參見注意事項 8）
15．加入預冷的 xx 毫升 YIJI 保存液（Reagent E），輕輕搖動試管混勻
16．放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1500g
17．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管（如果上清液含有
肉眼可見的殘渣，重復離心 5 分鐘一次，速度為 3000g）——此步驟去除細胞壁、淀粉顆粒、細胞核
和未溶解的細胞以及完整質(zhì)體等殘渣
18．放進 4℃超速離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g
19．小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物（注意：如果暫時停止操作，須暫時放
進－70℃冰箱里）
20．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到線粒體顆粒樣品中
21．渦旋震蕩 15 秒，混勻顆粒群
22．轉(zhuǎn)入 1.5 毫升離心管
23．置入冰槽中孵育 15 分鐘（注意：參見注意事項 12）
24．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）
25．加入 xx 微升 YIJI 去干擾液（Reagent H）
26．用 200 微升槍頭上下抽吸混勻
27．放進微型臺式離心機瞬時離心 5 秒鐘，速度為 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
28．放進 58℃恒溫水槽孵育 2 小時（注意：可以孵育 4 至 16 小時，增加萃取產(chǎn)量；參見注意事項 12）
29．置于室溫下冷卻 15 分鐘，直至處于室溫狀態(tài)（或置于冰槽里 15 至 30 秒）
30．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前搖勻）
31．渦旋震蕩 5 秒
32．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
33．移出上層液相溶液到新的 1.5 毫升離心管（注意：切莫觸碰液相交界面上的白色膜狀物）
34．加入 xx 微升YIJI 濃縮液（Reagent J）到新的離心管
35．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）
36．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）
37．在渦旋震蕩儀上震蕩 5 秒，充分混勻
38．放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：離
心前做好方位標記，以便離心后觀察管底沉淀顆粒）
39．小心抽掉上清液
40．加入 xx 毫升 YIJI 純化液（Reagent M）
41．放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
42．小心抽掉上清液
43．空氣中晾干沉淀顆粒群
44．加入 xx 微升 YIJI 緩沖液（Reagent N）
45．溶解后放進－20℃冰箱長期保存或移出 2 微升進行 PCR 反應
注意事項
1． 本產(chǎn)品為 10 次操作（1 克植物組織或 5 X 107細胞）
2． 線粒體操作均須在 4℃或以下狀態(tài)下進行
3． 操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是 YIJI 裂解液（Reagent B）和 YIJI 保存液
（Reagent E）
4． 建議使用足夠的組織或細胞量
5． 建議植物組織使用組織勻漿器操作；德國的 BRAUN 細胞勻漿器zui為理想
6． 建議嚴格控制操作時間
7． 通常勻化次數(shù)為 80 下達到 80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶
可以通過顯微鏡觀察 3 微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于 50％可以增加勻
化次數(shù)
8． 通常孵育 5 分鐘達到 80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通
過顯微鏡觀察 3 微升裂解物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于 50％可以增加孵育時間
和渦旋震蕩次數(shù)
9． YIJI 裂解液（Reagent B）具有強力吸附并去除多糖和酚類物質(zhì)的作用
10．不同組織，其線粒體含量不同；通常 1 克植物組織的線粒體含量為 10 至 50 微克線粒體蛋白
11．試劑中的溶液使用前搖勻；YIJI 酶解液（Reagent G）需放進 37℃凍融少許；為避免反復凍融，
建議適量分裝
12．可以通過增加線粒體溶解時間（30 分鐘）和酶解時間（直至 16 小時），獲得大量的 DNA 產(chǎn)量
13．通常 1 克植物組織或 5 X 107細胞中提取的線粒體DNA達 10 至 20 微克
14．本產(chǎn)品所獲得的線粒體DNA純度和產(chǎn)量zui為理想，確保無核DNA和外源性DNA污染
15．本公司提供系列植物線粒體分析技術產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無核酶污染
3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定萃取產(chǎn)量和純化程度高
4． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無基因組 DNA 污染