反相:吸附劑(固定相)是非極性或弱極性的，如硅膠鍵合C18,C8,C4，C2,-苯基等。流動相為極性(水溶液)或中等極性樣品基質(zhì)。
吸附劑的極性小于洗脫液的極性。
應(yīng)用:可以從強(qiáng)極性的溶劑中(如水樣)萃取是非極性或弱極性的化合物。
作用機(jī)理:非極性-非極性相互作用，如范德華力或色散力。
 
反相作用機(jī)理:
反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)上的碳?xì)滏I與目標(biāo)化合物的碳?xì)滏I之間的非極性作用力。通常，非極性的反相SPE柱較為適用于從極性基質(zhì)中萃取分離非極性及中等極性的目標(biāo)化合物。
 
對于通過非極性作用力吸附在非極性SPE柱上的目標(biāo)化合物，可以用具有非極性性質(zhì)的溶劑洗脫，如氯仿、環(huán)己烷、乙酸乙酯等。只要溶劑的洗脫強(qiáng)度足以破壞目標(biāo)化合物與吸附劑非極性官能團(tuán)之間的范德華力，就可以順利地將目標(biāo)化合物從SPE柱上洗脫下來。即便是極性較強(qiáng)的甲醇，對于許多化合物來說也具有足夠的非極性作用力將其洗脫。有時單一溶劑不能把疏水性強(qiáng)的目標(biāo)化合物*洗脫下來，則可考慮使用二氯甲烷：乙酸乙酯（1：1，體積比）。
 
反相固相萃取模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸降低，而它們的洗脫強(qiáng)度逐漸增大。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)化合物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下限度地洗脫干擾物，所選洗脫液應(yīng)能恰好*洗脫目標(biāo)化合物。