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可以說,疫情促進了PCR實驗室的標準化建設(shè),同時也大力推廣和應(yīng)用了PCR實驗室。除了建筑布局符合要求外,PCR實驗室的壓差也是保證安全的重要環(huán)節(jié)。
聚合酶鏈反應(yīng)實驗室的功能用房包括試劑配制室、樣品處理室、核酸擴增室和產(chǎn)品分析室(也可以擴增和分析同為一個房間)。每個房間在物理空間上必須*獨立,在使用中必須始終處于*分離的狀態(tài),不能有空氣直接連接。所以每個房間都會有一個緩沖室,用來保持主操作室的壓差,隔離每個房間的空氣。
聚合酶鏈反應(yīng)實驗室又稱基因擴增實驗室,是聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction)的大特定的脫氧核糖核酸片段,可視為生物體外的特殊脫氧核糖核酸復(fù)制。通過脫氧核糖核酸基因跟蹤系統(tǒng),可以快速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其準確性高達納米水平,準確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)的數(shù)量、復(fù)制性、感染性、感染性、需要服藥、肝功能異常變化,可以及時判斷患者使用哪種抗病物,判斷藥物的療效,為臨床治療提供可靠的檢驗依據(jù)。
PCR實驗室各功能區(qū)的功能。
試劑室(一區(qū)):儲存試劑的制備、試劑的分裝和擴展反應(yīng)混合液的準備、離心管、吸頭等消耗品的儲存和準備。
樣品處理室(二區(qū)):核酸(RNA、DNA)的提取、儲存和添加到擴增反應(yīng)管中。臨床樣品操作應(yīng)符合生物安全二級實驗室保護設(shè)備、個人保護和操作規(guī)范的要求。
核酸擴展室(三區(qū)):cDNA合成、DNA擴展和檢測。
產(chǎn)品分析室(四區(qū)):擴展片段的進一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、序列測定等。
一般來說,房間的壓差有正壓和負壓兩種,房間維持正壓主要是為了防止外部污染源的侵入,氣流的方向是從內(nèi)到外,房間維持負壓主要是為了防止內(nèi)部污染源的擴散,氣流的方向是從外到內(nèi)。
在GB50881-2013年《疾病預(yù)防控制中心建筑技術(shù)規(guī)范》中,對PCR實驗室功能用房環(huán)境設(shè)計參數(shù)提出了以下要求:
單向流動。
-表示沒有要求。
原則上,防止污染源的所有房間都應(yīng)設(shè)置為正壓,以避免外部污染源的侵入。例如,傳統(tǒng)的無菌檢測室和超凈工作臺應(yīng)遵循正壓原則。產(chǎn)生污染源的所有房間都應(yīng)設(shè)置為負壓,以防止內(nèi)部污染源的傳播。例如,特殊的生物安全實驗室和聚合酶鏈反應(yīng)擴展室應(yīng)設(shè)置為負壓。通風(fēng)柜和生物安全柜遵循負壓原則。
集中配置的PCR實驗室:
試劑準備的主操作室和緩沖室設(shè)置為正壓,
樣品處理的主要操作室和緩沖室設(shè)置為微負壓。
核酸擴散和產(chǎn)物分析的主要操作室和緩沖室設(shè)置為負壓,以防止擴散和電泳操作過程中產(chǎn)生的氣溶膠在開門過程中擴散到走廊,然后擴散到試劑準備室和樣品處理室,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
樣品處理雖然是污染操作,但在生物安全柜中進行。生物安全柜的功能主要是去除感染性氣溶膠,保護實驗樣品、操作人員和實驗室環(huán)境,避免操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和飛濺物。
聚合酶鏈反應(yīng)實驗室的試劑配制室、樣品處理室、核酸擴增室和產(chǎn)品分析室不應(yīng)共用空調(diào)回風(fēng)系統(tǒng)。核酸擴增室和產(chǎn)品分析室的鄰居也應(yīng)保持相對微負壓差。
組合PCR實驗室的空調(diào)負荷、通風(fēng)次數(shù)等原則上與BSL-2生物安全實驗室一致。PCR實驗室需要在暖通系統(tǒng)中設(shè)置獨立的新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng),PCR實驗室沒有空氣凈化的強制要求,只需設(shè)置初效和中效空氣過濾器即可。
方案1:
不同房間的排氣應(yīng)設(shè)置止回裝置,排氣扇吸入側(cè)應(yīng)設(shè)置活性炭等生物凈化裝置,標本制備區(qū)的整個排氣柜應(yīng)設(shè)置專用排氣扇。實驗室的排氣和送風(fēng)形成了定送變排的控制邏輯,生安柜的排氣和補氣采用了單獨的系統(tǒng)。暖通空調(diào)系統(tǒng)的壓力梯度控制原理如下圖所示。
聚合酶鏈反應(yīng)實驗室的氣流組織應(yīng)采用上送下排,送風(fēng)口和排風(fēng)口的布置應(yīng)將室內(nèi)氣流停滯的空間降至。同時,不得在生物安全柜操作面或其他氣溶膠操作場所的上方附近設(shè)置送風(fēng)口。
方案2:
除了使用專用的補風(fēng)機組來平衡生安柜的排氣外,還可以采用另一種方案,即增加樣品制備間平時輸送的新風(fēng)量,保持不變,以滿足生安柜打開時的風(fēng)量平衡要求。除了保持壓力梯度的排氣口外,還增加了與生安柜連鎖的排氣口。生安柜排氣機組設(shè)定風(fēng)量運行。暖通空調(diào)系統(tǒng)的壓力梯度控制原理如下圖所示。
生安柜打開時,連鎖排氣口關(guān)閉,生安柜關(guān)閉時,連鎖排氣口打開。室內(nèi)另一排氣口根據(jù)相鄰房間的壓力梯度改變風(fēng)量,與送風(fēng)形成定送變排的控制邏輯。
該方案節(jié)約了補氣專用空調(diào)機組,節(jié)約了機械室的使用面積,相對降低了初步投資成本,但對自控系統(tǒng)的要求很高,而且生安箱不運轉(zhuǎn)時新風(fēng)量比較大,因此在選擇時應(yīng)根據(jù)建設(shè)和運轉(zhuǎn)條件綜合考慮。
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