BCA蛋白濃度測定試劑盒BCA Protein Assay Kitp0012
      靈敏度高，檢測濃度下限達(dá)到25 μg/ml，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5 μg，待測樣品體積為1-20μl。
      在50-2000 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
      BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%
的Tween 20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇
(DTT)低于1mM， β-巰基乙醇( β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不適用BCA法時建議試用碧云天生產(chǎn)的 Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
     
      每個試劑盒可以檢測5000個樣品。 

包裝清單：

保存條件：
室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。
注意事項：
需酶標(biāo)儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm。需96孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會減少。
如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用碧云天Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006) 。
為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱。
EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用碧云天的 Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006) 。

使用說明：
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
a.取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。
b.取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980µl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長期保存。
2.BCA工作液配制
根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100 μl  BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
3.蛋白濃度測定
a.將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 補足到20μl ，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
b.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20 μ l。請注意記錄樣品體積。
c.各孔加入200μl  BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長孵育時間。
d.用酶標(biāo)儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。
e.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：
1. 測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。
2.是否每次測定時都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

相關(guān)產(chǎn)品：