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Cell Navigator 細(xì)胞膜染色試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于染色細(xì)胞膜的試劑盒，Cell Navigator 細(xì)胞質(zhì)膜染色試劑盒可快速，均勻地標(biāo)記質(zhì)膜，而沒(méi)有凝集素表現(xiàn)出的細(xì)胞類(lèi)型差異。它可以用作HCS（高含量篩選）的分割工具，以及對(duì)細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)行染色以用于標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡檢查。試劑盒中使用的綠色熒光染料可固定但不能通透，因此不適用于還涉及通過(guò)抗體探測(cè)內(nèi)部靶標(biāo)的實(shí)驗(yàn)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Navigator 細(xì)胞膜染色試劑盒。

適用儀器

熒光顯微鏡
激發(fā)：	FITC濾波片
發(fā)射：	FITC濾波片
推薦孔板：	黑色透明孔板或載玻片

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中準(zhǔn)備細(xì)胞
2.準(zhǔn)備并向細(xì)胞添加Cellpaint Green工作溶液
3.在37℃下孵育5至20分鐘
4.使用FITC濾光片組讀取熒光強(qiáng)度

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
Cellpaint 綠色原液（500X）：
將100 uL DMSO（組分C）添加到Cellpaint Green（組分A）小瓶中，制成500X儲(chǔ)備溶液。注意：20 µL Cellpaint Green 500X儲(chǔ)備溶液足以用于一個(gè)96孔板。如果管密封嚴(yán)密，可以將未使用的Cellpaint Green 500X儲(chǔ)備溶液分裝并在≤-20oC下保存1個(gè)月。避光并避免重復(fù)的凍融循環(huán)。

2.工作溶液配制

Cellpaint 綠色工作溶液（1X）：
將20 uL的500X儲(chǔ)備溶液添加到10 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合。注意：我們建議在使用前使工作溶液新鮮。

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樣品示例及操作

1.在細(xì)胞板中加入100 uL /孔（96孔板）或50 uL /孔（384孔板）的Cellpaint Green工作溶液。避光保存，在37oC下孵育細(xì)胞5-20分鐘。注意：細(xì)胞膜探針的濃度取決于具體應(yīng)用。可以根據(jù)特定的細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來(lái)改變?nèi)旧珬l件。

2.除去每個(gè)孔中的工作溶液。用生理緩沖液（例如HHBS，DPBS或您選擇的緩沖液）洗滌細(xì)胞3次，并替換為HHBS。

3.可選：染色后固定細(xì)胞。用4％甲醛固定細(xì)胞15-30分鐘。用生理緩沖液洗滌細(xì)胞三遍。

4.使用帶有FITC濾波片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞中的熒光信號(hào)。

圖1.在玻片上，Cellpaint Green與Hoechst 33342共染色的HL-60細(xì)胞的熒光圖像。使用熒光顯微鏡，使用帶有FITC濾鏡的60X油鏡對(duì)細(xì)胞成像。由于來(lái)自細(xì)胞邊界上方和下方的膜的所有熒光信號(hào)均被不加選擇地捕獲，因此圖像顯得更加刺破和擴(kuò)散。與常規(guī)的落射熒光成像相比，共聚焦熒光成像比常規(guī)的落射熒光顯微鏡更靈敏，可以為您提供更多的控制。如果可以使用共聚焦顯微鏡，則可能會(huì)獲得清晰的細(xì)胞膜成像。