適用儀器

樣品實驗方案

1.將細(xì)胞接種在滑動室或無菌玻璃蓋玻片上，并根據(jù)需要處理細(xì)胞
2.進(jìn)行甲醛固定。在室溫下用PBS中的3.0–4.0％甲醛孵育細(xì)胞10–30分鐘。
3.用PBS清洗固定的細(xì)胞2–3次。
可選：將PBS中的0.1％Triton X-100加入固定細(xì)胞中3至5分鐘以增加通透性。用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。
4.用封閉劑（例如在PBS中的5％BSA）封閉30分鐘。
5.按照特定產(chǎn)品的數(shù)據(jù)表中的建議，在稀釋緩沖液中稀釋一抗。覆蓋足夠的稀釋抗體以覆蓋蓋玻片上的細(xì)胞或腔室玻片的每個腔室。
6.用PBS清洗2-3次。
7.使用前，在室溫下加熱FluoroQuest™熒光信號增強溶液。
8.稀釋熒光第二抗體在FluoroQuest™熒光信號在室溫下增強溶液中，然后染色細(xì)胞1小時。對于大多數(shù)應(yīng)用，IgG偶聯(lián)物的二抗一般范圍在0.1-10 µg / mL之間。保持蓋玻片覆蓋或在潮濕的室內(nèi)避免蒸發(fā)。
9.用PBS洗滌細(xì)胞3次。
注意：在此步驟可以用熒光核染色劑或鬼筆環(huán)肽進(jìn)行其他染色。
10.將每個蓋玻片倒入帶有安裝介質(zhì)的清潔幻燈片上，是帶有抗褪色防腐劑的幻燈片。如果需要，用透明的拋光劑密封邊緣。
11.在顯微鏡下用正確的濾光片對細(xì)胞成像。將幻燈片存放在4°C的黑暗處。