樣品實驗方案

簡要概述

1.準備樣品/ Trolox（10 µL）
2.添加HRP（20 µL）
3.添加ReadiUse ABTS底物溶液（150 µL）
4.在室溫下孵育5分鐘
5.監(jiān)控405 nm處的吸光度

溶液配制

1.儲存溶液配制

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 辣根過氧化物酶（HRP）儲備溶液（2000X）：
向辣根過氧化物酶（組分A）的小瓶中加入1 mL分析緩沖液（組分B）。

1.2 Trolox標準溶液（100毫米）：
將100 µL DMSO加到Trolox瓶中（組分D）。

2.標準溶液配制

Trolox標準
通過使用稀釋因子= 2和高濃度= 1 mM在測定緩沖液（Componenet B）中稀釋100 mM Trolox標準溶液來制備Trolox標準溶液。

3.工作溶液配制

將2.5 uL的2000X HRP儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成1X HRP工作溶液。

樣品操作及實驗分析

表1.在透明的96孔微孔板中的Trolox標準品和測試樣品的布局。 SD = trolox標準品（SD1-SD7，0.0156至1 mM），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成

1.根據(jù)表1和表1中的布局，準備trolox標準品（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）（如有必要，在測定緩沖液中稀釋樣品，使抗氧化劑水平與Trolox處于同一范圍內(nèi)），表2。

2.在Trolox標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入20 µL HRP工作溶液，使總體積為30 µL /孔。

3.向每個孔中加入150 µL ReadiUse ABTS底物溶液（組分C），總體積為180 µL /孔。 注意：避免光照，并在聚丙烯容器中使用。

4.在室溫下孵育5分鐘。 注意：這5分鐘的保溫時間是一個指導原則。 可以改變孵育時間以獲得更合適的吸光度。

5.使用酶標儀讀取405 nm處的吸光度。