操作步驟

1.根據(jù)需要準(zhǔn)備細(xì)胞。例如，將貼壁細(xì)胞在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以40,000至80,000細(xì)胞/孔/100μL過(guò)夜  

對(duì)于384孔板，96孔或10,000至20,000個(gè)細(xì)胞/孔/25μL。

注意：應(yīng)對(duì)每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，以確定佳細(xì)胞密度。

2.準(zhǔn)備RatioWorks Protonex 綠色葡聚糖裝載解決方案：

2.1在1 mL 無(wú)菌水或Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）中制備1mg / mL Protonex 綠色葡聚糖原液。應(yīng)立即使用原液。任何未使用的溶液需要等分并在< -20 o C重新冷凍。

注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。

2.2在HHBS中制備20-100ug / mL Protonex 綠色葡聚糖加載溶液。

3.運(yùn)行內(nèi)吞作用測(cè)定

3.1取出培養(yǎng)基，將100μL/孔（96孔板）或25μL /孔（384孔板） Protonex Green Dextran 上樣溶液加入細(xì)胞板（步驟2.2）。

注1：如果您的化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/ 孔）。

注2： Protonex 綠色葡聚糖從早期內(nèi)體快速運(yùn)輸?shù)酵砥趦?nèi)體，隨后可能與溶酶體融合。為了幫助在內(nèi)體中可視化Protonex 綠色葡聚糖，我們建議增加標(biāo)記濃度并減少加載時(shí)間，并立即成像。

3.2將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育5至20分鐘。

3.3用HHBS或生長(zhǎng)培養(yǎng)基清洗并更換染料加載溶液。

3.4通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 443/505 nm處的熒光來(lái)進(jìn)行胞吞作用測(cè)定。