熒光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光底物，半胱天冬酶的在細(xì)胞凋亡中起重要作用。 FITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK為活細(xì)胞中活化的胱天蛋白酶-3的靈敏檢測(cè)提供了方便的手段。 FITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK是細(xì)胞可滲透的，的，并且在凋亡細(xì)胞中不可逆地結(jié)合活化的胱天蛋白酶-3。 基于我們的內(nèi)部研究，與我們測(cè)試的其他DEVD-FMK探針相比，F(xiàn)ITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK具有高的信號(hào)/背景比。 FITC標(biāo)簽允許通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞術(shù)或熒光板讀數(shù)器直接檢測(cè)凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的熒光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

以下說明書僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測(cè)定

1.1在DMSO中制備10mM儲(chǔ)備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測(cè)定溶液，如下所示：

50 L基質(zhì)原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時(shí)。

1.4使用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光，或使用吸光度酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度。

2.細(xì)胞Caspase檢測(cè)使用細(xì)胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲(chǔ)備溶液。

2.2根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲(chǔ)備溶液（來自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測(cè)定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細(xì)胞，并將細(xì)胞在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育至少1小時(shí)。

2.5用HHBS洗滌細(xì)胞至少一次。

2.6用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。

3.細(xì)胞Caspase檢測(cè)使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲(chǔ)備溶液。

3.2根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。

3.3將250 X DMSO儲(chǔ)備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細(xì)胞）添加到細(xì)胞溶液中，并將細(xì)胞在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育1 小時(shí)。

3.4用HHBS洗滌細(xì)胞至少一次。

3.5用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。