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百螢課堂:如何確定熒光分子的亮度?

時間:2024/3/20閱讀:53
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今天百螢為大家介紹一個非常實用的小技巧,用于確定熒光分子的亮度。如果你想選購一種熒光探針,而你已經(jīng)確切的了解到了幾種探針均可以滿足你的實驗要求,但是,哪一個才是熒光強度好的呢?求人不如求己,實驗還得靠自己!今天小螢告訴你之后,請收藏好它!

熒光分子的亮度取決于兩個因素:

1.消光系數(shù)(ε):熒光分子吸收特定波長的光的強度。

2.熒光量子產(chǎn)率(Φ):吸收光轉(zhuǎn)換為發(fā)射光的效率。

有小伙伴要問了,知道了消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率又該怎么辦呢?請記住以下公式:

亮度=消光系數(shù)(ε) x 熒光量子產(chǎn)率(Φ)

實例驗證:大家對于PE、APC、Cy5應(yīng)該都是比較熟悉的。

·PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400

·APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000

·Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000

現(xiàn)在相信大家不用我說,也能看出哪個更亮了吧!那有小伙伴又要問了,可是熒光探針那么多,我找不到確切的消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)量?。e著急,下面是我們?yōu)槟?/span>總結(jié)好的常用的產(chǎn)品消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率請收好!

iFluor 350

20000

0.95

在水性緩沖液中(pH=7.2)

iFluor 405

37000

0.91

iFluor 430

40000

0.78

iFluor 450

40000

0.82

iFluor 488

75000

0.9

iFluor 514

80000

0.83

iFluor 532

90000

0.68

iFluor 546

100000

0.67

iFluor 555

100000

0.64

iFluor 560

120000

0.57

iFluor 568

100000

0.57

iFluor 594

180000

0.53

iFluor 610

110000

0.85

iFluor 633

250000

0.29

iFluor 647

250000

0.25

iFluor 660

250000

0.26

iFluor 670

250000

0.63

iFluor 680

220000

0.23

iFluor 700

220000

0.23

iFluor 750

275000

0.12

iFluor 790

250000

0.13

iFluor 800

250000

0.11

iFluor 810

250000

0.05

iFluor 820

250000

N/D

iFluor 840

200000

0.02

PBS中

Alexa Fluor 488

73000

0.92

緩沖液(pH=7.2)

Alexa Fluor 532

81000

0.61

Alexa Fluor 546

112000

0.1

Alexa Fluor 568

88000

0.69

Alexa Fluor 594

92000

0.66

Alexa Fluor 647

270000

0.33

Alexa Fluor 660

132000

0.37

Alexa Fluor 680

183000

0.36

Alexa Fluor 700

205000

0.25

Alexa Fluor 750

290000

0.12

產(chǎn)品名稱

消光系數(shù)(ε)cm-1M-1

熒光量子產(chǎn)率(Φ)

備注

Cy3

150000

0.04

 

Cy3B

120000

0.58

 

Cy3B酸

120000

0.58

 

Cy5

250000

0.27(PBS)/0.4(乙醇)

 

Fluo-4

82000

0.16

 

Fluo-8

23430

0.16

 

Cal-590

78000

0.62

 

7-AAD

27500

0.02

在雙鏈DNA結(jié)合的情況下

AFC

17000

0.53

在乙醇中

Hoechst 33258

46000

0.034

 

SYTO 17

88000

0.964

 

SYTOX綠色

67000

0.53

DNA中

JOJO-1

171000

0.44

DNA中

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