中文名稱： Helixyte Green 熒光 ssDNA 定量試劑盒 *針對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行了優(yōu)化*

英文名稱： Helixyte™ Green Fluorimetric ssDNA Quantitation Kit *Optimized for Microplate Readers*

產(chǎn)品貨號(hào)： 17623

產(chǎn)品規(guī)格： 200 Tests

供 貨 商： AAT Bioquest

產(chǎn)品參數(shù)

Ex (nm)   498

Em (nm)   519

產(chǎn)品概述

Amplite 熒光 ssDNA 定量試劑盒以簡(jiǎn)單準(zhǔn)確的方式來檢測(cè)單鏈 DNA。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green ssDNA 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 DNA (ssDNA)。它使科研人員能夠量化低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。這種靈敏度超過吸光度方法的 10,000 倍以上。使用該試劑盒，可檢測(cè)低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。使用該試劑盒對(duì)一些 ssDNA 進(jìn)行了定量，包括具有相似靈敏度的 M13 和 φX174 病毒 DNA 以及變性小牛胸腺 DNA。它們的檢測(cè)限不受核酸試劑中常見污染物的明顯干擾，包括鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去污劑、蛋白質(zhì)、ATP、核苷酸和六堿基短寡核苷酸等。然而，雙鏈 DNA (dsDNA) 和 RNA 確實(shí)會(huì)干擾檢測(cè)，因?yàn)?Helixyte Green ssDNA 試劑會(huì)與 dsDNA 和 RNA 結(jié)合以產(chǎn)生熒光信號(hào)。 Amplite 熒光 ssDNA 定量試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可使用熒光酶標(biāo)儀定量 dsDNA。

適用儀器

熒光酶標(biāo)儀 

Ex:490 nm

Em：525 nm

Cutoff：515 nm

推薦孔板:純黑色孔板 

實(shí)驗(yàn)方案

概述

1.添加 100 µL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品
2.添加 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在室溫下孵育 5-10 分鐘
4.檢測(cè) Ex/Em=490/525 nm 處的熒光強(qiáng)度

注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量總核酸含量的示例。 打開前讓所有成分升溫至室溫。 目前沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)于 Helixyte Green ssDNA 染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。 由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑并小心處理。 應(yīng)特別小心處理 DMSO 原液，因?yàn)橐阎?DMSO 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。 

溶液制備

ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)溶液
將 10 uL 100 ug/mL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分 C）添加到 190 uL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中以獲得 5 ug/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行 1:3 稀釋以獲得連續(xù)稀釋的 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)溶液（SS2- SS7）。請(qǐng)使用AAT Bioquest連續(xù)稀釋計(jì)算器以方便數(shù)據(jù)處理。

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

將 100 μL Helixyte Green ssDNA（組分 A）加入 10 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，制備 Helixyte Green ssDNA 工作溶液。 通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。
注意：建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備工作溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。為獲得效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時(shí)內(nèi)使用。
注意：10 mL 的工作溶液對(duì)于一個(gè) 96 孔板就足夠了。

操作步驟

表 1. 純黑色 96 孔板中 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。 SS= ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=測(cè)試樣品

表2.各孔試劑組成

1.根據(jù)表 1和表 2 中提供的布局準(zhǔn)備 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn) (NS)、空白對(duì)照 (BL) 和測(cè)試樣品 (TS)。對(duì)于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑，而不是 100 μL。
2.將 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品、空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，使測(cè)定體積為 200 µL/孔。 對(duì)于 384 孔板，將 25 µL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個(gè)孔中，以獲得 50 µL/孔的總體積。
3.在室溫下孵育反應(yīng) 5 到 10 分鐘，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm 處）的熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光增加。

圖示

圖 1. ssDNA 劑量反應(yīng)是在 96 孔黑色孔板中使用 Amplite Fluorimetric ssDNA 定量試劑盒測(cè)量的。