百螢問號：細胞轉(zhuǎn)染前如何選擇轉(zhuǎn)染方法？

時間：2023/9/22閱讀：46

今天百螢為大家介紹細胞轉(zhuǎn)染的常見方法，以及它們之間的優(yōu)缺點比較。細胞轉(zhuǎn)染方法包括DEAE－葡聚糖法、磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、陽離子聚合物、病毒介導法、Biolistic 顆粒傳遞法（基因槍粒子轟擊法）、顯微注射法、電穿孔法等。感興趣的小伙伴一起來看看吧！

轉(zhuǎn)染方法		原理	主要應用	特點
DEAE－葡聚糖法		帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞	瞬時轉(zhuǎn)染	相對簡便、重復比磷酸鈣好，但對細胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清且一般只用于BSC-1，CV-1，COS細胞系
磷酸鈣法		磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，染瞬轉(zhuǎn)染	不適用于原代細胞（所需的DNA濃度較高），操作簡便但重復性差，有些細胞不適用細胞建議用CSCL梯度離心，轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多
陽離子脂質(zhì)體法		帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細胞膜上的唾液酸殘基的負電核結合；另一種解釋是通過細胞是內(nèi)吞作用而被進入細胞。(若DNA濃度過高，中和脂質(zhì)體表面電核，而降低了與細胞的結合能力)	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染，所有細胞	使用方法簡單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類型的裸露DNA或RNA，能轉(zhuǎn)染各種類型的細胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但在體內(nèi)，能被血清，并在肺組織內(nèi)累積，誘發(fā)強烈的抗炎反應，導致高水平的毒性，這在很大程度上限制了其應用
陽離子聚合物		帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進入細胞。	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染，所有細胞	除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復性好等特點外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低等特點，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。
病毒介導法	逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)	通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用而進入宿主細胞，之后反轉(zhuǎn)入酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞	可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等，但攜帶基因不能太大（<8kb），細胞需處分裂期，需考慮因素
病毒介導法	腺病毒(雙鏈DNA)	先和細胞表面的受體結合，繼而在αv整合素介導下被細胞內(nèi)吞	瞬時轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞	可用于難轉(zhuǎn)染的細胞，需考慮因素
Biolistic 顆粒傳遞法（基因槍粒子轟擊法）		將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達	瞬時性轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染	可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞
顯微注射法		用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染	轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞
電穿孔法		高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染，所有細胞	適用性廣，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組（>65kb）但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件，拷貝數(shù)較少1-20

目前市場上大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑均采用陽離子脂質(zhì)體法，百螢出售的Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑也采用該方法，它毒性更低，并且使轉(zhuǎn)染細胞具有更高的生存能力。與相同方法下的的大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑相比，Transfectamine 5000更易于使用，并且不需要特殊的培養(yǎng)基。

貨號	品名	規(guī)格	價格
60020-1	Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑	100ul	600
60020-3	Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑	3x100ul	1500
60020	Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑	500ul	2460
60021	Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑	1ml	3720
60022	Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑	5ml	9456

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