百螢課堂之-多重Caspase活性

時(shí)間：2023/9/1閱讀：64

半胱an酸蛋白酶，半胱an酸-天冬氨酸蛋白酶或半胱an酸依賴性天冬氨酸定向蛋白酶，是一個(gè)半胱an酸蛋白酶家族，在細(xì)胞凋亡(細(xì)胞程序性死亡) ，壞死和炎癥中發(fā)揮重要作用。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶在細(xì)胞發(fā)育和成年生命的大多數(shù)其他階段是很有必要的，并且因其在細(xì)胞中的作用而被稱為“劊Z手"蛋白質(zhì)。一些半胱天冬酶在免疫系統(tǒng)中也是淋巴細(xì)胞成熟所必需的。細(xì)胞凋亡的失敗是腫瘤發(fā)生和自身免疫性疾病的主要原因之一。也有報(bào)道說(shuō)，不必要的細(xì)胞凋亡發(fā)生在缺血或阿爾茨海默病。這些新發(fā)現(xiàn)激發(fā)了人們對(duì)半胱天冬酶作為潛在治療靶點(diǎn)的興趣，因?yàn)樗鼈兪窃?0世紀(jì)90年代中期發(fā)現(xiàn)的。

Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡測(cè)定試劑盒的目的是通過(guò)測(cè)量 Caspase 3活性來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶3被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的可靠指標(biāo)，因?yàn)榘腚譨n酸天冬氨酸蛋白酶 -3(CPP32/載脂蛋白酶)的激活對(duì)于細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)是重要的。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶3對(duì)氨基酸測(cè)序天冬氨酸-谷an酸-谷an酸-天冬氨酸具有底物選擇性。試劑盒中使用 Z-devD-ProRedTM 作為半胱天冬酶 -3活性的熒光指示劑。通過(guò)半胱天冬酶3切割 ProRedTM devD 阻斷肽殘基產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光 ProRedTM，其在約620nm 處熒光測(cè)定，在約530nm 處激發(fā)。

Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一個(gè)優(yōu)化的檢測(cè)方案的所有必需成分。該檢測(cè)方法穩(wěn)定可靠，可以很容易地適用于各種熒光平臺(tái)的高通量檢測(cè)，如微板檢測(cè)。使用96孔格式的每孔100μL 試劑，該試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行100次測(cè)定。使用384孔格式的每孔25μL 試劑，該試劑盒提供足夠的試劑來(lái)執(zhí)行400次測(cè)定。

Cell Meter Caspase3/7活性檢測(cè)試劑盒主要特點(diǎn)：

1. 多色功能，可以使用不同顏色的熒光指示劑同時(shí)檢測(cè)不同類型的半胱an酸活化，如半胱an酸8、9和10；

2. 穩(wěn)定性好，只需將試劑和細(xì)胞混合后，即可直接讀取結(jié)果，無(wú)需細(xì)胞裂解或透化細(xì)胞膜；

3. 方便性高，與常用的濾光片組合兼容。

Jurkat 細(xì)胞中 caspase 3 7的活性.png

圖1.檢測(cè) Jurkat 細(xì)胞中 caspase 3/7的活性。在同一天以200,000個(gè)細(xì)胞/孔/90μL 在 Costar 黑色壁/透明底部96孔板中接種 Jurkat 細(xì)胞。用或不用1μM 星形孢素處理細(xì)胞5小時(shí)。加入半胱天冬酶3/7測(cè)定溶液(100μL/孔) ，室溫孵育1小時(shí)。熒光強(qiáng)度在 Ex/Em = 540/620nm 處測(cè)定。

AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 為7.0的緩沖液中的熒光光譜.png

圖2.AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 為7.0的緩沖液中的熒光光譜。AMC，R110和 ProRedTM 半胱天冬酶底物非常適合于多路復(fù)用半胱天冬酶活性。

試劑盒	平臺(tái)	Ex(nm)	Em(nm)	貨號(hào)
Caspase3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“藍(lán)色熒光"	微孔板，HCS	360	570	22796
Caspase3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“綠色熒光"	微孔板，HCS	490	525	22796
Caspase3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“紅色熒光"	微孔板，HCS	540	620	22797
Caspase8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“藍(lán)色熒光"	微孔板，HCS	370	450	22812
Caspase8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“綠色熒光"	微孔板，HCS	490	525	22812
Caspase8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“紅色熒光"	微孔板，HCS	540	620	22816
Caspase9活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“紅色熒光"	微孔板，HCS	375	435	22813
Caspase9活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“藍(lán)色熒光"	微孔板，HCS	490	525	22798
Caspase9活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒“綠色熒光"	微孔板，HCS	540	620	22816

表1.用于測(cè)量Caspase3.7.8.9活性的檢測(cè)試劑盒

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