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當(dāng)前位置：西安百螢生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>胱天蛋白酶Caspase 系列產(chǎn)品實驗方案
產(chǎn)品型號：13406.13407.13408.13409
FITC-C6（C3）-DEVD-FMK能提供簡便靈敏的方法對活細(xì)胞中對的caspase進行檢測。FITC-C6（C3）-DEVD-FMK在凋亡細(xì)胞中具有通透性，性和不可逆結(jié)合的caspase-3的特點，是帶有FITC熒光標(biāo)記的caspase-3抑制劑。FITC標(biāo)記能直接通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或者熒光酶標(biāo)儀測定的Caspase。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶Caspase 3/7熒光底物 FITC-C6（C3）-DEVD-FMK 綠。
實驗方案
操作方法
以下協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。
使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測定
1.在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲備溶液。
2.如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。
3.將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。
4.使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光，或使用酶標(biāo)儀監(jiān)測吸光度。
使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針的細(xì)胞Caspase測定
1.在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲備溶液。
2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。
3.通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。
4.將等體積的處理過的細(xì)胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞至少1小時。
5.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。
6.通過流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強度。
使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針進行細(xì)胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）
1.通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。
2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。
3.以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細(xì)胞溶液中（例如2 µL至500 µL細(xì)胞），并將細(xì)胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。
4.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。
5.通過流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強度。
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