目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NAD激酶（NADK）測(cè)試盒可見分光光度法
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更新時(shí)間：2023-12-29 15:31:06瀏覽次數(shù)：543評(píng)價(jià)
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| 貨號(hào) | BK-01S6324 |
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注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：NAD激酶（NADK）測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6324
產(chǎn)品分類：輔酶Ⅰ系列
商品介紹：
測(cè)定意義 測(cè)定意義: NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?；w進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。 測(cè)定原理： NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT），通過在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度（吸光值的變化）可反映出NADK活性的大小。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pGenesil- 2 pGenesil- 2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
0.5%葡萄糖肉湯瓊脂 250g
1瓶 Hepa1-6細(xì)胞株 Hepa1-6 低溫運(yùn)輸和保存
含225ml 3%氯化鈉堿性蛋白胨水均質(zhì)袋 3% NaCl Alkaline Peptone Water 10個(gè)/包
1.5mL RNase A溶液，10 mg/mL RNase A Solution 4℃（短期）或-20℃（長(zhǎng)期）保存
50mL Potassium Chloride Solution（溶液）,5M Potassium Chloride Solution,5M 常溫保存
1g 硫酸卡那干粉 Kanamycin Sulfate Powder 4℃避光保存
2 ug pProEX-c pProEX-c 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
糖發(fā)酵基礎(chǔ)肉湯 Bromcresol Purple Broth Base 250g
5g 瑞氏色素 Wright Stain 室溫保存
50T 轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
NAD激酶（NADK）測(cè)試盒可見分光光度法Phospho-cdc2 (Tyr15) 磷酸化周期素依賴激2抗體 規(guī)格: 0.1mlCKLFSF7/CMTM7 趨化素樣因子超家族成員7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.5mlATP7B 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
VSIG4 T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlTTF-2 甲狀轉(zhuǎn)錄因子-2抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-31 白細(xì)胞介素31抗體 規(guī)格: 0.2mlHDBP2/PTTG1IP 瘤毒調(diào)控因子1抗體（鋅指蛋白395） 規(guī)格: 0.2ml
CKLF 趨化素樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCyclin M2/CNNM2 周期素M2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Biotin/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlAdducin protein 內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml
FAM55D FAM55D蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRNF70 環(huán)指蛋白70抗體 規(guī)格: 0.2ml
NF66/alpha Internexin α-中連蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSTK3 絲/蘇蛋白激3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Histone H3 (Thr3) 磷酸化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.1mlGAPDH(3E12)-Loading Control 3-磷酸甘油醛脫單克隆抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
Dog IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF828/C13orf8 鋅指蛋白828抗體 規(guī)格: 0.2ml
CHRNA4 堿型乙酰受體α4抗體 規(guī)格: 0.1ml
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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