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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測(cè)試盒微量法

ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測(cè)試盒微量法
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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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貨號(hào) BK-01S6663
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商品介紹:

測(cè)定意義:

ACLEC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶,其催化產(chǎn)生的乙??捎糜谥舅岷铣珊吞兼溠娱L、黃酮類物質(zhì)合成、氨基酸合成等。

測(cè)定原理:

ACLATP和存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測(cè)定NADH減少速率,計(jì)算ACL活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測(cè)試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6663

11.png 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

125mL PIPES Lysis Buffer with Triton,2X  PIPES Lysis Buffer with Triton,2X  常溫保存

1mL 溶液,50mg/mL Carbenicillin Disodium Salt -20℃避光保存

腸道菌富集肉湯培養(yǎng)基(USP) Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel 250g

50mL ABTS 溶液,7mM  ABTS Solution -20℃避光保存

2 ug pZL507 pZL507 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

5次 一步法97孔板單菌落質(zhì)粒DNAout(離心法) One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常溫

2 ug pET-48b(+) pET-48b(+) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

金氏B培養(yǎng)基管  5ml*20支

1瓶 A9細(xì)胞株 A9 低溫運(yùn)輸和保存

GN增菌液顆粒 Gram Negative Enrichment Broth 250g

100µg 人基因組DNA,男性 Human Genomic DNA 4℃保存

ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測(cè)試盒微量法TCF12/HEB  轉(zhuǎn)錄因子12抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

BCL7C  B細(xì)胞白/蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-c-Raf(Ser43)  磷酸化原基因c-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

ARH/LDL receptor adaptor protein  脂蛋白受體銜接蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF13  纖維母細(xì)胞生因子13抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD7  CD7抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PAK1(Ser144)  磷酸化p21激活激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Gelsolin  凝溶膠蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

SDF-1/CXCL12  基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Wnt8A  信號(hào)通路WNT8A抗體 規(guī)格: 0.2ml

E. coli LPS  大腸桿菌脂多糖抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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