目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>淀粉系列>> 淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法
| 貨號 | BK-01S6693 |
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商品介紹：
測定意義: 淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過程的可逆反應酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。 在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質體中，負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細胞質基質中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產生葡萄糖-1-磷酸，負責葡萄糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過程中的關鍵酶。 在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級，一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。 測定原理： 淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產生葡萄糖-6-磷酸，并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產生NADPH，使340nm下吸光值增加。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據!
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6693 |
實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1g 苯 Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride（PMSF） 室溫保存
改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑B Modified Camp-BAP Agar additive B 1ml*5
100uL 萬VanA抗性基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存
2 ug pMET C pMET C 低溫運輸，-20℃保存
原材料系列
1瓶 SH-SY5Y細胞株 SH-SY5Y 低溫運輸和保存
改良Giolitti-Cantobi肉湯 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250g
10mg 5- 氟 -5’- 脫氧尿苷 5’dFUrd (5-Fluoro-5’Deoxyuridine) 室溫保存
50T 大豆內源基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
10次 一步式PAGE染液 One-Step PAGESTAIN 4℃保存
50T 呼吸道合胞病毒A組PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法Gax 生終止特異性同源盒基因抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf82 17號染色體開放閱讀框82抗體 規(guī)格: 0.2ml
HSPA6 熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5 Cy5標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1mlTransketolase(CT) 轉酮醇(轉羥乙醛)抗體（C端） 規(guī)格: 1ml
Ube2L3 泛素蛋白連接L3抗體 規(guī)格: 0.2mlCLLD7 核苷酸交換因子CLLD7抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAGP2 纖微絲相關糖蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlFrizzled 2 Wnt信號受體FZD2蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PNPT1 多核苷酸磷酸化蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL12RB2 白細胞介素-12受體β2抗體 規(guī)格: 0.1ml
E2 tag E2 tag標簽抗體 規(guī)格: 0.1ml
CDC4/FBW7/SEL10 瘤抑制因子FBW7抗體 規(guī)格: 0.2ml
CEBP-alpha 轉錄調節(jié)因子C/EBP α 抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
BEX4 腦表達X連鎖蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
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