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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖代謝系列>> β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒可見分光光度

β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒可見分光光度
  • β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒可見分光光度
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更新時間:2023-12-26 07:06:18瀏覽次數(shù):607評價

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貨號 BK-01S6750
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒可見分光光度

產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣

檢測方法:可見分光光度法

產(chǎn)品貨號:BK-01S6750

產(chǎn)品分類:糖代謝系列
商品介紹:

測定意義:

β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量,還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。

測定原理:

β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。

自備用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實驗方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

250mL Potassium Phosphate Solution,0.5M, pH7.6   Potassium Phosphate Solution,0.5M, pH7.6   常溫保存

10mL 溶液,50mg/mL Spectinomycin Solution 4℃避光干燥保存

2 ug pQE-30LacIq pQE-30LacIq 低溫運輸,-20℃保存

3%NaCl阿拉伯糖  20支

250mL MES Buffer,1.0M,pH7.5   MES Buffer,1.0M,pH7.5   常溫保存

產(chǎn)毒培養(yǎng)基 Toxin-Producing Medium 250g

5g α- 酮戊二酸 α-Ketoglutaric Acid 4℃保存

50T 輪狀病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

5mL 口腔角質(zhì)細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

100mL AMPD Buffer,0.2M,pH8.0  AMPD Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存

1000mL 超快核酸銀染試劑盒 Rapid Silver Stain for Nucleic Acid 常溫

β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒可見分光光度Rabbit Anti-Bov IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

BNP(H1G3)  人腦鈉素單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

AMPD3  紅細(xì)胞苷脫氨3抗體 規(guī)格: 0.2ml

synaptotagmin-2  突觸結(jié)合蛋白相關(guān)基因2抗體 規(guī)格: 0.1ml

CDK8  周期素依賴性激8抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Goat IgG/FITC  FITC標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.3ml

MARK2  絲/蘇蛋白激MARK2抗體 規(guī)格: 0.2ml

FAM70A  FAM70A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Chicken IgG  羊抗雞IgG 規(guī)格: 1mg

NDUFS3  線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Band3/CD233  紅細(xì)胞陰離子交換蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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