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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>土壤系列>> 土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法

土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法
  • 土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法
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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時間:2023-12-25 09:51:52瀏覽次數(shù):685評價

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貨號 BK-01S6844
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣

檢測方法:可見分光光度法

產(chǎn)品貨號:BK-01S6844

產(chǎn)品分類:土壤系列
商品介紹:

測定意義:

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測定原理:

氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在細胞呼吸過程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現(xiàn)紅色,在波長485nm處有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品:

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、漏斗,濾紙、可見分光光度計、玻璃比色可見分光光度計/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請用戶自備)。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

 

細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實驗方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

抗生素5號 Antibiotic NO.5 250g

1瓶 D341 Med細胞株 D341 Med 低溫運輸和保存

TSA平板(7cm) Tryptose Soya Agar 10個/包

10U ATP硫酸化 ATP Sulfurylase -20℃保存

500mL PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0  PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0  常溫保存

1g 氨芐干粉 Ampicillin Powder 4℃保存

2 ug pPink LC pPink LC 低溫運輸,-20℃保存

葡萄糖發(fā)酵管  20支

2 ug pMSCV-puro pMSCV-puro 低溫運輸,-20℃保存

mCPC mCPC Medium 250g

25g L- 鹽酸鹽 L-Histidine HCl    室溫干燥保存

土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法EMP3  上皮細胞膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlELL2  聚合延伸因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Bad(Ser118)  磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-c-Jun(Tyr170)  磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta 2 Microglobulin  β2微球蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3  Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162)  磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml

CK15  細胞角蛋白15抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP24A1  細胞色素P450 24A1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mast Cell Tryptase  肥大細胞蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlFactor VII light chain  凝因子VII 規(guī)格: 0.2ml

RABGAP1  Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlCOX7A2  氧化VIIA亞型2抗體 0.1ml

Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185)  磷酸化胰島素受體β抗體 規(guī)格: 0.1mlCollagen VII  7型膠原抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779)  磷酸化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪激A3+A4+A5抗體 規(guī)格: 0.1ml

SPARCL1/Ecm2  細胞外基質(zhì)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-NMDAR1(Ser897)  磷酸化谷受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

FDC-SP/ADC  濾泡樹突細胞分泌蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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