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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>土壤系列>> 土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒微量法

土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒微量法
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更新時(shí)間:2023-12-25 09:49:47瀏覽次數(shù):710評(píng)價(jià)

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貨號(hào) BK-01S6843
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本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6843

商品介紹:

測(cè)定意義:

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測(cè)定原理:

氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在細(xì)胞呼吸過(guò)程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現(xiàn)紅色,在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品:

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、漏斗,濾紙、可見(jiàn)分光光度計(jì)、玻璃比色可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請(qǐng)用戶(hù)自備)。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類(lèi)及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻?yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

1mL C溶液,5mg/mL Mitomycin Solution  4℃避光保存

100mL MOPSO Buffer,0.2M,pH7.5  MOPSO Buffer,0.2M,pH7.5  常溫保存

5%乳糖發(fā)酵管  20支

2 ug pCAMBIA3300 pCAMBIA3300 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

雙水解試驗(yàn)用(AD) Aaginine dehydrolase Medium 5g

5g  Inosine,F(xiàn)ree Base   室溫干燥保存

50T 淋球菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

25 mg DiBAC4(3) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

50mL Ammonium Acetate Solution(乙酸銨溶液),1M  Ammonium Acetate Solution,1M  常溫保存

10mL miRNA尿素-PAGE上樣液,6× miRNAoN -20℃保存

2 ug pYX212-VHB pYX212-VHB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒微量法Dog IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1mlDCBLD2  內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

ANKRD45/CT117  瘤/睪抗原117 規(guī)格: 0.2mlVAPA  囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml

Kappa-casein/CSN3  κ-酪蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlBeta-lactoglobulin  β-球蛋白抗體 規(guī)格: 1ml

Goat anti-Mouse IgG whole serum  羊抗小鼠IgG抗清 規(guī)格: 1mlMSR1/CD204  巨噬細(xì)胞清道夫受體1/2/3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PRKACB(Thr198)  磷酸化蛋白激C亞性抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-chicken IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

TNFRSF14/HVEM  瘤壞死因子受體超家族成員14抗體 規(guī)格: 0.2mlBTG3  高表達(dá)神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體 規(guī)格: 0.2ml

KARS2/Lysyl tRNA synthetase  賴(lài)tRNA的連接抗體 規(guī)格: 0.2mlLCMT1  亮羧基甲基轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml

EphA4  酪蛋白激A4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Cdc25B (Ser149)  磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-B-Raf (Ser602)  磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1mlRELN/Reelin  絡(luò)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-STAT1 (Ser727)  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 規(guī)格: 0.1mlFAM155A  FAM155A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

HOXB8  同源盒蛋白B8抗體 規(guī)格: 0.2mlLMO2  T淋巴細(xì)胞易位蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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