細胞增殖實驗檢測方法

細胞增殖與細胞凋亡、細胞周期等是腫瘤研究的重要表型，是分子生物學(xué)和藥理學(xué)研究解決的問題之一。通過在細胞中過表達或干擾某個基因研究基因?qū)毎鲋衬芰Φ挠绊懀M一步研究基因的功能，或?qū)毎M行藥物處理，研究藥物對增殖的影響。

1. MTT法：是一種檢測細胞存活和生長的方法。該方法已廣泛用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟、快捷。

原理：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其吸光度值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

2. CCK-8法:可用于簡便而準(zhǔn)確的細胞增殖和毒性分析，常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。

原理：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

3. Brdu: 即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期，S期活體注射或細胞培養(yǎng)加入。而后利用抗Brdu單克隆抗體ICC染色顯示增殖細胞。同時結(jié)合其它細胞標(biāo)記物雙重染色可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學(xué)有重要意義。

但由于抗體分子量大，難于摻入并被有效檢測。因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性。這些處理方法會破壞抗原識別位點，此外許多細胞周期分析的染料都需要dsDNA。這種處理方法也使得同一樣本無法同時進行細胞周期分析。對于植物細胞等有細胞壁的分析。采用抗體檢測還需要消化細胞壁，細胞壁消化酶常含有一些雜質(zhì)，會導(dǎo)致檢測的可靠性降低，同時BrdU檢測則需要進行長時間的孵育--幾個小時甚至過夜。

4. EDU: 即5-Ethynyl-2’- deoxyuridine, 是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中。通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細胞DNA復(fù)制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細胞標(biāo)記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。