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保存：-20度 有效期1年
產(chǎn)品組分：
組分 | |
2X Yeast PCR Mix | 1ml |
Yeast lysis buffer | 200ul |
本試劑盒含有綠色染料，可在反應結(jié)束后直接進行電泳，能夠快速擴增酵母中重組質(zhì)粒目的基因片段，省時省力。Yeast lysis >uffer用于破壞酵母的細胞壁; 2X Yeast OCR mix含PCR buffer, dNTPs, MgC12, 熱啟動快速Taq酶，客戶只需加入引物和模板/哮母菌落即可進行擴增，減少移液操作，提高了穩(wěn)定性，且2XYeast PCR mix中含有保戶劑，反復凍融后仍可保持穩(wěn)定性。PCR產(chǎn)的3’ 端帶有A，可直接用于TA克隆。該試劑盒提供用于50 μ 1 PCR體系的40次擴增實險。
實驗流程
1、吸取3-3.5 μ | Yeast lysisbuffer到CR管中，用無菌槍頭或牙簽蘸取適量酵母i EPCR管中。
2、吸打(攪拌)混勻后，置于98‘C反應0-20 min。
3、再準備一支無菌PCR管，按下表配制反應系。
PCR反應體系:
2XYeast PCR mix | 25ul |
primer F (10 μ M） | 2ul |
primer R (10 μM) | 2ul |
tempI ate | 1ul |
ddH20 | To 50ul |
*步驟2的反應液短暫離心,混勻后吸取1μ I作為模板，為適宜
PCR反應條件:
反應溫度 | 反應時間 | 循環(huán) |
95C | 3min | 1 |
95C | 15sec | 30-32 |
TM | 15sec | |
72C | 15sec/Kb | |
72C | 5min | 1 |
4C | 1 |
∞
該退火溫度根據(jù)引物的Tm值進行調(diào)整,一般設(shè)置Tm -5 C
