β-內(nèi)酰胺酶是一大類能夠水解β-內(nèi)酰胺的酶。β-內(nèi)酰胺環(huán)是所有β-內(nèi)酰胺抗生素（包括qingmeisu衍生物，toubaojunsu，單bactams和碳青霉烯）中的常見元素。通過水解，β-內(nèi)酰胺酶會(huì)破壞β-內(nèi)酰胺環(huán)的打開，從而使分子的抗菌性能失活。通過合成β-內(nèi)酰胺酶，來自臨床和非臨床環(huán)境的細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素的耐藥性越來越高。為了克服這種耐藥性，通常將β-內(nèi)酰胺酶抑制劑（如克拉維酸）與β-內(nèi)酰胺類抗生素一起使用。因此，檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶活性對(duì)于評(píng)估β-內(nèi)酰胺類抗生素以及預(yù)防抗生素耐藥性至關(guān)重要。AAT Bioquest' 比色β-內(nèi)酰胺酶活性測(cè)定試劑盒提供了靈敏的比色測(cè)定法，用于測(cè)量生物樣品中的β-內(nèi)酰胺酶活性。使用Nitrocefin可以檢測(cè)到β-內(nèi)酰胺酶的活性，該酶在被β-內(nèi)酰胺酶水解后會(huì)從黃色變?yōu)榧t色?？梢允褂梦舛扔?jì)酶標(biāo)儀通過測(cè)量490 nm至380 nm波長(zhǎng)下的OD比率來執(zhí)行測(cè)定。

1. 準(zhǔn)備β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）

2. 加入β-內(nèi)酰胺酶工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育30-60分鐘

4. 監(jiān)測(cè)OD比為490/380 nm時(shí)的吸光度增加

重要說明
開始實(shí)驗(yàn)前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒成分的小瓶。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1.β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（50 mU / mL）：
將100 µL ddH ₂ O加入小瓶β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)液（組分C）中，制成50 mU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

向990 µL 1x PBS緩沖液中加入10 µL 50 mU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，以生成500 µU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取500 µU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7），并在PBS中進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以得到連續(xù)稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD6-SD1）。注意：稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)立即使用。

準(zhǔn)備工作溶液

將50 µL硝苯丁酮原液（組分A）加入5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合，制成β-內(nèi)酰胺酶工作溶液。注意：此β-內(nèi)酰胺酶工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。β-內(nèi)酰胺酶工作溶液不穩(wěn)定，每次使用都應(yīng)準(zhǔn)備新鮮。