綠色熒光蛋白（GFP）衍生物被廣泛用作熒光報(bào)告基因，以研究細(xì)胞和分子水平的生物過(guò)程，包括標(biāo)記細(xì)菌。不幸的是，基于GFP的細(xì)菌標(biāo)記是乏味的，并且?guī)追N重要的生物仍然難以修飾熒光蛋白的表達(dá)。SYTO-9是細(xì)菌基于GFP的熒光標(biāo)記的補(bǔ)充，已被廣泛用于以更方便的方式（即通過(guò)簡(jiǎn)單的孵育）標(biāo)記細(xì)菌。但是，據(jù)報(bào)道，SYTO-9可顯著抑制某些細(xì)菌的生長(zhǎng)。AAT Bioquest開(kāi)發(fā)了MycoLight™Red JJ94，與SYTO-9相比，對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用zui小。此外，MycoLight™Red JJ94可以與廣泛使用的GFP探針一起用于細(xì)菌的多色檢測(cè)。它的激發(fā)和發(fā)射分別在?637和?651 nm處。這與大多數(shù)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀通常配備的He-激光激發(fā)和Cy5濾光片組完美匹配。MycoLight™Red JJ94是一種遠(yuǎn)紅色熒光DNA結(jié)合染料，可直接用于活細(xì)菌細(xì)胞標(biāo)記，可用于后續(xù)的感染研究。它具有較低的固有熒光，但是與DNA結(jié)合后，其熒光發(fā)射強(qiáng)度會(huì)急劇增加。MycoLight™Red JJ94可以輕松染色活細(xì)菌而不會(huì)損害微生物的生長(zhǎng)。在相同條件下，SYTO-9基本上抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，而MycoLight™Red JJ94與液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中的正常細(xì)菌*相容。

平臺(tái)

• 在不影響正常微生物生長(zhǎng)的情況下弄臟活細(xì)菌
• 使用Cy5濾光片組和He激光激發(fā)，可在大多數(shù)流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡中廣泛使用
• 可用于細(xì)菌中的多色檢測(cè)
• 穩(wěn)定貼標(biāo)幾個(gè)小時(shí)

重要   開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鼋M件。

程序

1. 用您選擇的緩沖液稀釋MycoLight ^TM Red JJ94。MycoLight ^TM Red JJ94可以直接添加到細(xì)菌培養(yǎng)基中，zui終濃度為2.5 µM。
2. 渦旋混合樣品，然后孵育至少10分鐘。
3. 通過(guò)熒光顯微鏡或帶有Cy5過(guò)濾器的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)樣品的熒光信號(hào)。

注意：  以上方案可適用于大多數(shù)細(xì)菌菌株。這些條件需要針對(duì)每個(gè)菌株和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整。生長(zhǎng)培養(yǎng)基，細(xì)胞密度，其他生物的存在和因素可能會(huì)影響染色。玻璃器皿上殘留的洗滌劑也可能會(huì)影響許多生物的染色，并導(dǎo)致溶液中存在或不存在細(xì)胞的情況下，染上鮮艷的物質(zhì)。注意：  稀釋MycoLightTM Red JJ94時(shí)請(qǐng)使用塑料管，因?yàn)橄♂尩奈蹪n會(huì)粘附在玻璃上。通常，在不含磷酸鹽的緩沖液中可獲得*結(jié)果。 注意：  可以使用不同的細(xì)菌菌株優(yōu)化染料濃度以獲得*結(jié)果。 注意：  自MycoLight ^TMRed JJ94與細(xì)菌的生長(zhǎng)*兼容，可以將活細(xì)菌與MycoLight ^TM Red JJ94長(zhǎng)時(shí)間孵育。