吞噬作用定義為細(xì)胞對質(zhì)膜包膜內(nèi)顆粒的細(xì)胞攝取。通過吞噬和破壞入侵的微生物，吞噬作用的過程對于先天免疫應(yīng)答至關(guān)重要。吞噬作用還需要通過清除凋亡小體來維持組織穩(wěn)態(tài)和重塑。吞噬作用的攝取機制取決于顆粒的大小，受體-配體相互作用以及細(xì)胞骨架的參與。一旦內(nèi)在化，吞噬體就會與溶酶體融合，形成用于消化的次級吞噬體，導(dǎo)致pH值逐漸降低。我們的Cell Meter™熒光吞噬分析試劑盒利用*的pH依賴性Protonex™600紅膠乳珠結(jié)合物。珠粒已準(zhǔn)備好使用懸浮液。與大多數(shù)現(xiàn)有的熒光染料不同，Protonex™600紅膠乳珠偶聯(lián)物在細(xì)胞外無熒光。但是，由于它們位于酸性吞噬體/吞噬溶酶體內(nèi)部，其熒光急劇增加。該特性使其易于使用，而無需進(jìn)行臺盼藍(lán)淬滅步驟，并且是研究吞噬作用及其調(diào)控的強大工具。Cell Meter™熒光吞噬分析試劑盒還包括綠色熒光細(xì)胞活力染料，該染料可同時檢測活細(xì)胞和通過熒光顯微鏡檢查吞噬過程。該測定法也可以適用于熒光微板讀取器和流式細(xì)胞儀檢測。該特性使其易于使用，而無需進(jìn)行臺盼藍(lán)淬滅步驟，并且是研究吞噬作用及其調(diào)控的強大工具。Cell Meter™熒光吞噬分析試劑盒還包括綠色熒光細(xì)胞活力染料，該染料可同時檢測活細(xì)胞和通過熒光顯微鏡檢查吞噬過程。該測定法也可以適用于熒光微板讀取器和流式細(xì)胞儀檢測。該特性使其易于使用，而無需進(jìn)行臺盼藍(lán)淬滅步驟，并且是研究吞噬作用及其調(diào)控的強大工具。Cell Meter™熒光吞噬分析試劑盒還包括綠色熒光細(xì)胞活力染料，該染料可同時檢測活細(xì)胞和通過熒光顯微鏡檢查吞噬過程。該測定法也可以適用于熒光微板讀取器和流式細(xì)胞儀檢測。

1. 平板細(xì)胞
2. 添加12.5 µL Protonex™600紅乳膠珠綴合物
3. 在37°C孵育4小時
4. 添加12.5 µL CytoTrace™綠色
5. 在37°C孵育30分鐘
6. 使用得克薩斯紅和FITC濾光片通過顯微鏡監(jiān)測熒光

重要說明
在開始實驗之前，將所有套件組件解凍至室溫。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Protonex™600 Red-Latex珠綴合物溶液（12X）：
在2 mL細(xì)胞生長培養(yǎng)基（含10％FBS）中添加8 µL Protonex™600 Red-Latex珠綴合物（組分A）。注意：未使用的磁珠可以在4°C下存儲。

2. CytoTrace™Green儲備溶液（400X）：
將20 µL DMSO（組分C）添加到CytoTrace™Green（組分B）小瓶中，并充分混合。注意：未使用的CytoTrace™Green DMSO儲備溶液可以等分到一次性小瓶中，并保存在-20°C下。

準(zhǔn)備工作溶液

CytoTrace™Green工作溶液（12X）：
在2 mL細(xì)胞生長培養(yǎng)基中加入5 µL CytoTrace™Green儲備溶液（400X）并充分混合。