甘油是在肝臟和脂肪組織中合成甘油三酸酯和磷脂的前體。禁食時，儲存在這些脂質(zhì)小滴中的甘油三酸酯可被水解產(chǎn)生游離甘油和脂肪酸。釋放到血液中的游離甘油的量與甘油三酸酯/脂肪酸循環(huán)速率成正比，這在代謝調(diào)節(jié)和產(chǎn)熱中很重要。Amplite™熒光甘油測定試劑盒提供了一種基于熒光的靈敏測定方法，用于測量生物樣品中的甘油水平。該測定法基于甘油的酶偶聯(lián)反應(yīng)，其中可以在HRP偶聯(lián)反應(yīng)中使用我們的Amplite™HRP底物檢測產(chǎn)物過氧化氫。熒光信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。有了這種熒光甘油測定試劑盒，

1. 準(zhǔn)備甘油標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
2. 加入甘油工作溶液（50 µL）
3. 在室溫下孵育10-30分鐘
4. 監(jiān)控Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光增加

重要說明
為了獲得*效果，強烈建議使用黑色印版。開始實驗前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Amplite™HRP底物儲液（200X）：
添加50 μ DMSO（成分E）的L放入Amplite™HRP底物（小瓶組分A ），以使200X Amplite™HRP底物儲備溶液。避光。

2.甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mg / mL）：
將1 mL的ddH 2 O或1x PBS緩沖液添加到小瓶的甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D ）中，制成1 mg / mL甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

將10μL的1 mg / mL甘油 標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到990μL1x  PBS緩沖液中， 以生成10μg/ mL的甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液（GS7）。取10 µg / mL甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液（GS7），并在1x PBS緩沖液中進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到系列稀釋的甘油標(biāo)準(zhǔn)液（GS6-GS1）。

準(zhǔn)備工作溶液

1. 將5 mL測定緩沖液（組分C ）添加到一瓶酶混合物（組分B ）中，并充分混合。

2.  將25 µL 200X Amplite™HRP底物原液添加到組分B + C 的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作液。注意：  這種甘油工作溶液足以用于一個96孔板。它不穩(wěn)定，請及時使用。

程序

表1.  黑色96孔微孔板中甘油標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。GS =甘油標(biāo)準(zhǔn)品（GS1-GS7，0.01至10 µg / mL），BL =空白對照，TS =測試樣品。 

表2.  每個孔的試劑組成

1. 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備甘油標(biāo)準(zhǔn)品（GS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
    
2. 向甘油標(biāo)準(zhǔn)液，空白對照和測試樣品的每個孔中添加50 µL甘油工作溶液，以使甘油總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，應(yīng)在每個孔中添加25 µL甘油工作溶液，總體積為50 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)10-30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="border-collapse:collapse; height:34; width:558.02pt">13831Amplite™熒光法β-羥基丁酸（酮體）檢測試劑盒Amplite™ Fluorimetric Beta-Hydroxybutyrate (Ketone Body) Assay Kit200 Tests13832Amplite™比色法丙三醇檢測試劑盒Amplite™ Colorimetric Glycerol Assay Kit200 Tests