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3-磷酸??甘油（G3P）是糖酵解代謝途徑中的重要中間體。動物，真菌和植物使用G3P產(chǎn)生ATP。它用于在大腦和骨骼肌細胞中再生NAD +。G3P與肥胖等脂質(zhì)失衡疾病有關(guān)。Amplite™甘油3-磷酸分析試劑盒提供了zui靈敏的定量G3P方法之一。該試劑盒使用Amplite™Red底物定量G3P濃度，該濃度與G3P氧化酶介導(dǎo)的酶偶聯(lián)反應(yīng)中過氧化氫的產(chǎn)生成比例。該套件是一種優(yōu)化的“混合和讀取”格式，與HTS應(yīng)用程序兼容。如圖1所示，它在100 µL溶液（0.41 µM）中僅檢測到41個picomole G3P。可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行測定，而無需分離步驟。使用熒光酶標(biāo)儀可以輕松讀取其信號。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組件A：Amplite™紅色底物（光敏） | 1個小瓶 |
| 組分B：酶混合物 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分C：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 成分D：3-磷酸甘油（G3P）標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（凍干粉） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
- 準(zhǔn)備G3P標(biāo)準(zhǔn)或測試樣品（50 µL）
- 加入G3P工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育10-30分鐘
- 在Ex / Em = 540/590 nm時讀取熒光強度
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red底物儲備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™Red底物（組分A）小瓶中，制成200X儲備液。避免暴露在光線下。
2. 3-磷酸甘油（G3P）標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
加入250 µL ddH 2 O加入G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）的樣品瓶中，制成10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將10 µL的10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)儲備液添加到990 µL 1X PBS緩沖液中，以生成100 µM的標(biāo)準(zhǔn)溶液（CS7）。然后執(zhí)行1：3的系列稀釋，以得到系列稀釋的G3P標(biāo)準(zhǔn)品（CS6-CS1）。注意：稀釋的G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。
準(zhǔn)備工作溶液
1.將5 mL測定緩沖液（組分C）添加到酶混合瓶（組分B）中，并充分混合。
2.將25 µL Amplite™Red底物儲備液（200X）加入組分B和C的瓶子中，制成G3P工作溶液（組分A，B和C）。注意：請立即使用并遠離光線。 注意：可以將組分B和組分C的未使用混合物分成單份使用，并保存在-20°C下。
| 13838 | Amplite™比色法甘油-3-磷酸檢測試劑盒 | Amplite™ Colorimetric Glycerol 3-Phosphate (G3P) Assay Kit | 200 Tests |
| 13840 | Amplite™比色法草酰乙酸檢測試劑盒 | Amplite™ Colorimetric Oxaloacetate Assay Kit *Red Color* | 200 Tests |
