過氧化物酶是一個小分子（MW?40 KD），通?？梢砸?：1的比率與抗體偶聯(lián)。由于其體積小，它很少會引起抗體/抗原復(fù)合物形成的位阻問題。與其他標(biāo)記酶相比，過氧化物酶便宜。與過氧化物酶有關(guān)的主要缺點是它們對許多防腐劑的耐受性低，即使在低濃度下也能使過氧化物酶的活性失活。HRP偶聯(lián)物被廣泛用作ELISA，免疫組織化學(xué)技術(shù)以及Northern，Southern和Western印跡分析的輔助檢測試劑。我們提供一種快速，快速（10分鐘）的HRP分析，它是一步一步，均勻，無需洗滌的分析系統(tǒng)。該試劑盒可用于ELISA，表征酶反應(yīng)動力學(xué)以及高通量篩選氧化酶抑制劑等。

平臺

組件

1. 準(zhǔn)備HRP標(biāo)準(zhǔn)和/或測試樣品（50 µL）

2. 加入HRP工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育10-30分鐘

4. 監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm（截止= 575 nm）的熒光強度

重要筆記
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。在硫醇如DTT和β-巰基乙醇的存在下，組分A是不穩(wěn)定的。濃度高于10 µM的硫醇的存在會大大降低測定的動態(tài)范圍。NADH和guguanggantai（還原形式：GSH）可能會干擾測定。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Amplite™紅色過氧化物酶底物儲備液（100X）：
將250 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™紅色過氧化物酶底物（組分A）的小瓶中，制成100X Amplite™紅色過氧化物酶底物原液。儲備溶液應(yīng)及時使用。遠離光線。

2. HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（20 U / mL）：
將1 mL測定緩沖液（組分C）添加到辣根過氧化物酶（組分D）小瓶中，制成20 U / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. H ₂ O ₂儲備溶液（20 mM）：
將22.7 µL的3％H ₂ O ₂（0.88 M，組分B）添加到977 µL的測定緩沖液（組分C）中，制成20 mM H ₂ O ₂儲備溶液。注意：稀釋的H ₂ O ₂溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應(yīng)丟棄。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

在1999 µL分析緩沖液（組分C）中加入1 µL 20 U / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到10 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取10 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）并進行1：3連續(xù)稀釋，以使用測定緩沖液（組分C）獲得連續(xù)稀釋的HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD6- SD1）。

準(zhǔn)備工作溶液

將50μL的100X Amplite™紅色過氧化物酶底物儲備溶液和50μL的20 mM H ₂ O ₂儲備溶液添加到4.9 mL的測定緩沖液（組分C）中，制成HRP工作溶液。遠離光線。