我們的Cell Meter™檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞生存力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。線粒體脫氫酶（例如LDH）活性的測(cè)量是一種可以量化細(xì)胞數(shù)量和監(jiān)測(cè)細(xì)胞生存力的*方法。這種細(xì)胞活力測(cè)定試劑盒提供了一種快速，簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確和均質(zhì)的測(cè)定方法，用于對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光檢測(cè)。該測(cè)定基于以下觀察：通過(guò)接受活細(xì)胞中線粒體呼吸鏈的電子，藍(lán)色和非熒光刃天青素被還原為粉紅色熒光染料（試鹵靈）。產(chǎn)生的試鹵靈的量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。使用該試劑盒進(jìn)行的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測(cè)定的檢測(cè)靈敏度高于其他測(cè)定（例如MTT）。由于試劑盒成分非常穩(wěn)定且細(xì)胞毒性zui小，因此可能需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間（例如24至48小時(shí)）。該測(cè)定可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行。該試劑盒具有高靈敏度（<100個(gè)CHO細(xì)胞），非放射性和免清洗方法的特點(diǎn)，使其適用于高通量篩選細(xì)胞增殖或針對(duì)多種化合物的細(xì)胞毒性，并適用于多種儀器平臺(tái)。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測(cè)定方案。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。該試劑盒每孔使用20 ul試劑（96孔格式），可提供足夠的試劑來(lái)執(zhí)行1000次測(cè)定。該試劑盒每孔以384孔格式使用10 ul試劑，可提供足夠的試劑來(lái)執(zhí)行2,000個(gè)測(cè)定。

1. 用測(cè)試化合物準(zhǔn)備細(xì)胞（100 µL /孔/ 96孔板或50 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入1/5體積的測(cè)定溶液（組分A）

3. 將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育1-24小時(shí)

4. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鼋M件。

程序

1. 在具有黑色壁和透明底部的組織培養(yǎng)微孔板中，每孔培養(yǎng)100至10,000個(gè)細(xì)胞。將測(cè)試化合物添加到細(xì)胞中，并在37°C，5％CO _2的培養(yǎng)箱中孵育所需的時(shí)間（例如24、48或96小時(shí)）。對(duì)于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。對(duì)于96孔板，建議的總體積為100 µL，對(duì)于384孔板，建議的總體積為50 µL。
   

2. 同時(shí)設(shè)置以下控件。

1. 陽(yáng)性對(duì)照：含有細(xì)胞和已知的增殖或細(xì)胞毒性誘導(dǎo)劑。
   

2. 陰性對(duì)照：包含細(xì)胞，但不含測(cè)試化合物。
   

3. 載體對(duì)照：包含細(xì)胞和用于遞送測(cè)試化合物的載體。
   

4. 非細(xì)胞對(duì)照：含有不含細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。注意：血清中的LDH將有助于背景熒光。
   

5. 測(cè)試化合物對(duì)照：包含用于遞送測(cè)試化合物的載體[漢克氏pinghengyanrongye（HBSS）或磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）]和測(cè)試化合物。一些測(cè)試化合物具有很強(qiáng)的自發(fā)熒光，可能會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。注意：對(duì)于所有帶有生長(zhǎng)培養(yǎng)基的96孔板，將所有對(duì)照的總體積匹配至100 µL，對(duì)于384孔板，將其匹配至50 µL。
   

3. 將測(cè)定溶液（組分A）預(yù)熱至37°C，并在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前將其*混合。
   

4. 向每個(gè)孔中添加20 µL /孔（96孔板）或10 µL /孔（384孔板）的測(cè)定溶液（組分A）。輕輕搖動(dòng)平板30秒鐘以混合試劑。
   

5. 將其在37°C，5％CO _2的培養(yǎng)箱中避光保存1-24小時(shí)。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于單個(gè)細(xì)胞類型的代謝率和所用細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。不建議將孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，因?yàn)槿刑烨嗫梢赞D(zhuǎn)化為無(wú)色的二氫試鹵靈。
   

6. 使用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 540/590 nm（截止= 570nm））監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。

數(shù)據(jù)分析

從包含細(xì)胞的那些孔的值中減去非細(xì)胞對(duì)照孔的背景熒光讀數(shù)。注意：空白孔的背景熒光可能因生長(zhǎng)培養(yǎng)基或微量滴定板的來(lái)源而異。

每個(gè)孔中的熒光讀數(shù)指示該孔中的細(xì)胞數(shù)。

根據(jù)以下公式計(jì)算樣品和對(duì)照的細(xì)胞活力百分比：
％細(xì)胞活力= 100×（F _樣品 -F _o）/（F _ctrl -F _o）
F _樣品是存在測(cè)試化合物時(shí)的熒光讀數(shù)。
F _ctrl是在沒(méi)有測(cè)試化合物的情況下（車輛對(duì)照）的熒光讀數(shù)。
F _o是平均背景（非細(xì)胞對(duì)照）熒光強(qiáng)度。