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鋅是必需的微量礦物質(zhì)元素，在許多生物過程中起著重要作用。它是許多酶，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達控制所必需的重要因素。鋅的狀態(tài)還影響細(xì)胞分裂，生長，分化，發(fā)育和衰老的基本過程。鋅缺乏的臨床體征包括肩周炎，免疫力低下，腹瀉，愈合不良，發(fā)育遲緩，性腺功能低下，胎兒生長衰竭，畸形和流產(chǎn)。在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中非常需要簡單，直接和自動化就緒的測量程序。AAT Bioquest的Amplite™熒光鋅定量試劑盒提供了一種使用我們專有的Metaltel檢測生物樣品中鋅濃度的簡單方法；Zn 520，其中鋅以增強的熒光與探針結(jié)合。Zinc探針對Zn2 +的熒光響應(yīng)大大增強（大于200?300倍）。它具有較高的Zn2 +特異性，對其他金屬（包括Ca2 +，Mg2 +，Mn2 +和Cu2 +）的響應(yīng)很小。該測定法可用于生物學(xué)樣品，例如血清，血漿和尿液，檢測靈敏度為0.2 µM（13 ng / mL）。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 485納米 |
| 發(fā)射 | 525納米 |
| 隔斷 | 515納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組分A：Metal Fluor™鋅520 | 1小瓶（50 µL） |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（15毫升） |
| 組分C：ZnCl2標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（100 mM，100 µL） |
測試樣品（50 µL）或Zn 2+標(biāo)準(zhǔn)品
添加鋅探針試劑（50 µL）
在室溫下孵育5-10分鐘
在Ex / Em = 485/525 nm處讀取熒光
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）：
將10 µL的100 mM ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）添加到990 µL的測定緩沖液（組分B）中，得到1 mM ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)溶液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將100 µL的1 mM鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到900 µL的測定緩沖液（組分B）中，以獲得100 µM的ZnCl 2 標(biāo)準(zhǔn)溶液（Zn7）。然后，以100 µM ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)溶液進行1：3的系列稀釋，以得到系列稀釋的ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)液（Zn6-Zn1）。
準(zhǔn)備工作溶液
將25 µL Metal Fluor™Zn 520（組分A）添加到5 mL測定緩沖液（組分B）中，制成Zn工作溶液。
程序
表1.固態(tài)黑色96孔微孔板中ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。Zn =鋅標(biāo)準(zhǔn)液（Zn1-Zn7，0.1至100 µM）；BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| 鋅1 | 鋅1 | ... | ... |
| 鋅2 | 鋅2 | ... | ... |
| 鋅3 | 鋅3 | ||
| 鋅4 | 鋅4 | ||
| 鋅5 | 鋅5 | ||
| 鋅6 | 鋅6 | ||
| 鋅7 | 鋅7 |
表2.每個孔的試劑分配。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| 鋅1-鋅7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.1至100 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 樣品 |
用測定緩沖液（組分B）將測試樣品稀釋至5-100 µM范圍。
根據(jù)表1和表2提供的布局，準(zhǔn)備ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)品（Zn），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL 。
在每個ZnCl 2標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白對照和測試樣品的孔中加入50 µL的鋅工作溶液，以使ZnCl 2的總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL鋅測定緩沖液添加到每個孔中，總體積為50 µL /孔。
在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)5-10分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 485/525 nm處監(jiān)視熒光的增加。
19000 Amplite™熒光法鋅離子定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Zinc Ion Quantitation Kit 200 Tests 19001 Amplite™比色法鋅離子定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric Zinc Ion Quantitation Kit 200 Tests 19005 Amplite™熒光法汞離子定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Mercuric Ion Quantitation Kit 200 Tests 19501 ReadiUse™（TCA)法去除樣本蛋白試劑盒 ReadiUse™ TCA Deproteinization Sample Preparation Kit 200 Tests
