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活性氧（ROS）在細(xì)胞信號傳導(dǎo)和維持生理細(xì)胞代謝中很重要。過量的ROS會破壞細(xì)胞成分，從而與多種疾病相關(guān)，包括癌癥，代謝紊亂，神經(jīng)退行性疾病等。產(chǎn)生抗氧化劑，包括酶，大分子和小分子，以抵抗ROS引起的對生物體的傷害。體液，組織和細(xì)胞中抗氧化活性的定量分析提供了重要的生物學(xué)信息。我們的Amplite™比色抗氧化劑測定試劑盒使用ABTS作為抗氧化劑活性的比色指示劑，其依據(jù)是觀察到抗氧化劑具有防止ABTS（2，2'-疊氮基雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）氧化為辣根過氧化物酶（HRP）和過氧化氫（H2O2）的ABTS +。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 405納米 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 成分A：辣根過氧化物酶 | 1小瓶（凍干粉） |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
| 組件C：ReadiUse™ABTS基板解決方案 | 1瓶（35毫升） |
| 組件D：Trolox | 1小瓶（2.5毫克） |
- 準(zhǔn)備樣品/ Trolox（10 µL）
- 加入HRP工作溶液（20 µL）
- 添加ReadiUse™ABTS底物溶液（150 µL）
- 在室溫下孵育5分鐘
- 監(jiān)控405 nm處的吸光度
重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑盒組件平衡至室溫。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.辣根過氧化物酶（HRP）儲備溶液（2000X）：
將1毫升測定緩沖液（組分B）加到辣根過氧化物酶（組分A）小瓶中。
2. Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將100 µL DMSO加到Trolox小瓶中（組分D）。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
通過使用稀釋因子= 2和zui高濃度= 1 mM在測定緩沖液（Componenet B）中稀釋100 mM Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液來制備Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液。
準(zhǔn)備工作溶液
HRP工作溶液（1X）：
將2.5 uL 2000X HRP儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成1X HRP工作溶液。
程序
表1.在透明的96孔微孔板中的Trolox標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。SD = trolox標(biāo)準(zhǔn)品（SD1-SD7，1至0.0156 mM），BL =空白對照，TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2.每個孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| SD1-SD7 | 10微升 | 連續(xù)稀釋（1至0.0156 mM） |
| BL | 10微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 10微升 | 樣品 |
- 根據(jù)表1和表1中的布局，準(zhǔn)備trolox標(biāo)準(zhǔn)品（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）（必要時在Assay Buffer中稀釋樣品，使抗氧化劑水平與Trolox處于同一范圍內(nèi)）。表2。
- 在Trolox標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入20 µL HRP工作溶液，使總體積為30 µL /孔。
- 向每個孔中添加150 µL ReadiUse™ABTS底物溶液（組分C），總體積為180 µL /孔。注意：避免光照，并在聚丙烯容器中使用。
- 在室溫下孵育5分鐘。注意：這5分鐘的保溫時間是一個指導(dǎo)原則。可以改變孵育時間以獲得更合適的吸光度。
- 使用酶標(biāo)儀讀取405 nm處的吸光度。
15900 Cell Meter™抗氧化活性檢測試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric Antioxidant Activity Assay Kit 200 Tests 15991 Cell Meter™比色法細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化損傷(MDA)檢測試劑盒 Cell Meter™ Intracellular Colorimetric Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit 200 Tests 16000 ROS Brite™活性氧熒光探針570 ROS Brite™ 570 *Optimized for Detecting Reactive Oxygen Species (ROS)* 1 mg 16002 ROS Brite™活性氧熒光探針670 ROS Brite™ 670 *Optimized for Detecting Reactive Oxygen Species (ROS)* 1 mg 16004 ROS Brite™活性氧熒光探針700 *體內(nèi)成像優(yōu)化* ROS Brite™ 700 *Optimized for in Vivo Imaging* 1 mg
