腸激酶（也稱為腸肽酶）是由十二指腸壁細胞產(chǎn)生的siansuan蛋白酶，是人和動物消化系統(tǒng)中的關(guān)鍵酶。腸激酶將yidambaimei原轉(zhuǎn)化為yidanbaimei的活性形式，從而導(dǎo)致胰腺消化酶的后續(xù)活化。腸激酶的缺乏會導(dǎo)致腸道消化功能障礙。腸激酶的抑制可能通過抑制與癌變和轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白酶而具有抗腫瘤作用。因此，腸激酶的高選擇性和靈敏檢測在生化應(yīng)用中起著關(guān)鍵作用。Amplite™比色腸激酶活性測定試劑盒提供了用于定量腸激酶活性的靈敏測定。

協(xié)議摘要

1. 準備測試樣品和腸激酶標準液（50 µL）

2. 加入等體積的腸激酶工作溶液（50 µL）

3. 在37°C下孵育30-60分鐘

4. 監(jiān)測405 nm處的吸光度增加

重要說明
開始實驗前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. EK Yellow™儲備溶液（100X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到EK Yellow™（組分A）中，制成100X儲備溶液。

2.腸激酶底物原液（100X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到腸激酶底物（組分B）中制成100X原液。

3.腸激酶標準溶液（10 µg / mL）：
將50 µL ddH ₂ O + 0.1％BSA加入腸激酶標準小瓶（組分D）中，制成10 µg / mL腸激酶儲備液。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

將10 µL的10 µg / mL腸激酶標準溶液加到990 µL的測定緩沖液（組分C）中，得到100 ng / mL的腸激酶溶液（EK7）。然后在測定緩沖液中進行1：2的連續(xù)稀釋以獲得連續(xù)稀釋的腸激酶標準品（EK6-EK1）。注意： EK標準僅用于陽性對照，不應(yīng)作為酶活性的定量標準。

準備工作溶液

將50 µL EK Yellow™儲備溶液和50 µL腸激酶底物儲備溶液加入5 mL的測定緩沖液（組分C）中；充分混合以制成腸激酶（EK）工作溶液（組分A + B + C）。注意：分析混合物足以用于一塊96孔板。它不穩(wěn)定，請及時使用。

程序

表1.在96孔透明底部微孔板中腸激酶標準品和測試樣品的布局。EK =腸激酶標準品（EK1-EK7，1.56至100 ng / mL）; BL =空白對照；TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，將腸激酶標準品（EK），空白對照（BL）和測試樣品（TS）準備到96孔透明底部微孔板中。對于384孔板，請使用25 µL每孔試劑，而不是50 µL。
   

2. 將50 µL EK工作溶液添加到腸激酶標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中，使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL EK工作溶液添加到每個孔中，總體積為50 µL /孔。
   

3. 將反應(yīng)混合物在37°C下孵育30-60分鐘。
   

4. 用吸光度板讀數(shù)器監(jiān)測吸光度的增加，并在OD 405 nm處進行路徑檢查。

數(shù)據(jù)分析

0.110- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™Enterokinase (ng/mL)AbsorbanceHover mouse to interact

從空白標準孔獲得的讀數(shù)（吸光度）用作陰性對照。從其他標準的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數(shù)，以獲得標準曲線和方程式。該方程式可用于計算腸激酶樣品。