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葡萄糖氧化酶是一種二聚體蛋白，可催化β-D-葡萄糖氧化為過(guò)氧化氫和D-葡萄糖基1,5-內(nèi)酯，后者水解為葡萄糖酸。它被廣泛用于測(cè)定體液中的葡萄糖以及從飲料，食品和其他農(nóng)產(chǎn)品中去除殘留的葡萄糖和氧氣。此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物傳感器中以檢測(cè)葡萄糖。Amplite™葡萄糖氧化酶測(cè)定試劑盒提供了一種快速靈敏的方法來(lái)測(cè)定溶液中的葡萄糖氧化酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。該試劑盒使用我們的Amplite™Red底物，可以使用酶標(biāo)儀在570 nm處進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 570納米 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
| 成分C：辣根過(guò)氧化物酶（HRP） | 1個(gè)小瓶 |
| 成分D：葡萄糖氧化酶 | 1瓶（100單位） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 成分F：葡萄糖 | 1個(gè)小瓶 |
協(xié)議摘要
準(zhǔn)備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
添加工作溶液（50 µL）
在37°C下孵育10-30分鐘
監(jiān)測(cè)OD = 570 nm處的吸光度
重要說(shuō)明
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）：
將100 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™Red（組分A）小瓶中。注意：Amplite™Red在存在硫醇（如二硫蘇糖醇（DTT））的情況下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7 – 8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液（pH 7.4）。
2. HRP儲(chǔ)備溶液（50X）：
將1毫升測(cè)定緩沖液（組分B）添加到辣根過(guò)氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
將1 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到小瓶葡萄糖氧化酶（組分D）中。
4.葡萄糖儲(chǔ)備溶液（10X）：
將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到葡萄糖小瓶（組分F）中。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
通過(guò)將2 µL的100 U / mL葡萄糖氧化酶原液稀釋到200 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）中以制備1000 mU / mL的葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液，從而制備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液。然后xianjin行1：100連續(xù)稀釋，然后再進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以獲得從10 mU / mL到0.156 mU / mL（GOS1- GOS7）的系列稀釋葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液。
準(zhǔn)備工作溶液
將20 µL的Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X），100 µL的HRP儲(chǔ)備液（50X）和500 µL的葡萄糖儲(chǔ)備液（10X）加入4.3 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，制成5 mL的工作溶液。
程序
表1. 在透明底部96孔微孔板中葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。GOS =葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（GOS1- GOS7，0.156至10 mU / mL），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| GOS1 | GOS1 | ... | ... |
| GOS2 | GOS2 | ... | ... |
| GOS3 | GOS3 | ||
| GOS4 | GOS4 | ||
| GOS5 | GOS5 | ||
| GOS6 | GOS6 | ||
| GOS7 | GOS7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| GOS1-GOS7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.156至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（GOS），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
在每個(gè)孔中添加50 µL工作溶液到葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液，空白對(duì)照和測(cè)試樣品中，使總測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µL GO工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
避光保存，在37°C下將反應(yīng)孵育10至30分鐘。
使用吸光度板讀數(shù)器在OD = 570 nm處監(jiān)控吸光度的增加。
11300 Amplite™熒光法葡萄糖氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glucose Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11301 Amplite™熒光法髓過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11302 Amplite™熒光法guansuan氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
