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尿素是動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的zui終降解產(chǎn)物。它在肝臟中產(chǎn)生，由腎臟分泌并通過(guò)尿液排泄。尿素的測(cè)定對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)健康狀況非常有用。血尿素氮（BUN）測(cè)試以尿素形式測(cè)量血液中的氮含量，主要與肌酐測(cè)試一起用于評(píng)估腎功能，幫助診斷腎臟疾病。我們的Amplite™比色尿素測(cè)定試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單而靈敏的比色法，用于定量測(cè)定生物樣品（例如血清，血漿和尿液等）中尿素的濃度。該測(cè)定基于尿素在測(cè)定緩沖液中的酶聯(lián)反應(yīng)，生產(chǎn)出藍(lán)色的產(chǎn)品。產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與樣品中尿素的濃度成正比，可以在660-670 nm處進(jìn)行比色測(cè)定。該Amplite™比色尿素測(cè)定試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單的測(cè)定方法，可在150 µL的測(cè)定體積中檢測(cè)低至10 µM的尿素。該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 665海里 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 組分A：測(cè)定酶混合物 | 1小瓶（凍干粉） |
| 組分B：測(cè)定緩沖液I | 1瓶（10毫升） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液II | 1瓶（10毫升） |
| 成分D：尿素標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（1M，100 µL） |
準(zhǔn)備尿素標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
加入尿素工作溶液（50 µL）
在室溫或37°C下孵育30-60分鐘
添加分析緩沖液II（50 µL）
讀取665 nm處的吸光度
重要筆記
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.分析酶混合儲(chǔ)備溶液（100X）：
添加100 µL ddH 2 O加入到分析酶混合液（組分A）的小瓶中，制成100X分析酶混合儲(chǔ)備液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將1μL的1.0 M尿素標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到999 µL的DPBS中，以生成1.0 mM的標(biāo)準(zhǔn)尿素溶液（US7）。取1.0 mM尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到剩余的尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液（US6-US1）。
準(zhǔn)備工作溶液
將50μL重構(gòu)的測(cè)定酶混合儲(chǔ)備溶液（100X）添加到5 mL的測(cè)定緩沖液I（組分B）中，制成尿素工作液。注意：尿素工作溶液應(yīng)立即使用，并避免光照。隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，測(cè)定靈敏度將降低。建議使用新鮮的尿素工作液以獲得*效果。
程序
表1.在透明的底部96孔微孔板中尿素標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。US =尿素標(biāo)準(zhǔn)品（US1-US7，1至1000 µM），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| 美國(guó)1 | 美國(guó)1 | ... | ... |
| 美國(guó)2 | 美國(guó)2 | ... | ... |
| 美國(guó)3 | 美國(guó)3 | ||
| 美國(guó)4 | 美國(guó)4 | ||
| 美國(guó)5 | 美國(guó)5 | ||
| 美國(guó)6 | 美國(guó)6 | ||
| 美國(guó)7 | 美國(guó)7 |
表2.每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| US1-US7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋液（1至1000 µM） |
| BL | 50微升 | DPBS |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備尿素標(biāo)準(zhǔn)品（US），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑，而不是50 µL。
向尿素標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中添加50 µL尿素工作溶液，以使尿素測(cè)定總體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，向每個(gè)孔中添加25 µL尿素工作溶液，總體積為50 µL /孔。
在避光條件下，于室溫或37°C下孵育反應(yīng)30-60分鐘。
向每個(gè)孔中添加50 µL測(cè)定緩沖液II（組分C），以使總測(cè)定體積為150 µL /孔。對(duì)于384孔板，向每個(gè)孔中添加25 µL分析緩沖液II（組分C），總分析體積為75 µL /孔。
在室溫下孵育10-15分鐘，并使用吸光度酶標(biāo)儀監(jiān)控660-670 nm處的吸光度增加。注意：添加測(cè)定緩沖液II（組分C）后，顏色變?yōu)辄S色，孵育后帶有尿素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的孔將顯示藍(lán)綠色。顏色強(qiáng)度將在15至30分鐘內(nèi)達(dá)到zui大值，并與尿素濃度成正比。注意： zui終顏色在室溫下可穩(wěn)定約1個(gè)小時(shí)，并且顏色強(qiáng)度會(huì)隨著時(shí)間而降低。
10058 Amplite™比色法尿素定量試劑盒 *藍(lán)色* Amplite™ Colorimetric Urea Quantitation Kit *Blue Color* 200 Tests 10059 Amplite™比色法氨定量試劑盒*藍(lán)色* Amplite™ Colorimetric Ammonia Quantitation Kit *Blue Color* 200 Tests 10060 Amplite™熒光法guguanggantaiGSH/GSSG比率快速檢測(cè)試劑盒*綠色熒光* Amplite™ Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200 Tests 10070 Amplite™比色法丙二醇（MDA）定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit 200 Tests 10071 Amplite™熒光法法丙二醇（MDA）定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit 200 Tests 10085 Amplite™比色法α-酮戊二酸定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit 200 Tests 10087 Amplite™熒光法α-酮戊二酸定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit 200 Tests
