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當(dāng)前位置:南京沃博生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>昆蟲細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)當(dāng)如何選擇?
轉(zhuǎn)染試劑主要作用是輔助將質(zhì)粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白質(zhì)等外源物質(zhì)輸送到細(xì)胞內(nèi)部,目前已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)試劑。令人擔(dān)憂的是,現(xiàn)在市面上的轉(zhuǎn)染試劑種類繁多,質(zhì)量參差不齊,那我們應(yīng)該如何選擇一款zuishiyong于自己實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)染試劑呢?
昆蟲細(xì)胞表達(dá)是一種用于產(chǎn)生具有簡(jiǎn)單翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的平臺(tái)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和重組桿狀病毒的產(chǎn)生是昆蟲細(xì)胞表達(dá)的常用方法。TransIT-Insect是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的轉(zhuǎn)染試劑,專門針對(duì)各種昆蟲細(xì)胞類型的高基因表達(dá)進(jìn)行了優(yōu)化
轉(zhuǎn)染試劑主要作用是輔助將質(zhì)粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白質(zhì)等外源物質(zhì)輸送到細(xì)胞內(nèi)部,目前已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)試劑。令人擔(dān)憂的是,現(xiàn)在市面上的轉(zhuǎn)染試劑種類繁多,質(zhì)量參差不齊,那我們應(yīng)該如何選擇一款zuishiyong于自己實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)染試劑呢?
昆蟲細(xì)胞表達(dá)是一種用于產(chǎn)生具有簡(jiǎn)單翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的平臺(tái)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和重組桿狀病毒的產(chǎn)生是昆蟲細(xì)胞表達(dá)的常用方法。TransIT®-Insect是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的轉(zhuǎn)染試劑,專門針對(duì)各種昆蟲細(xì)胞類型的高基因表達(dá)進(jìn)行了優(yōu)化。
產(chǎn)品性能:
★ 特殊的DNA遞送—在昆蟲細(xì)胞類型中,包括Sf9、High Five™ 和S2
圖1. 使用TransIT®-Insect高效轉(zhuǎn)染桿狀病毒基因組DNA。6孔板里進(jìn)行轉(zhuǎn)染,每孔5 x 105 Sf9細(xì)胞,質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑比例1:3,使用0.5ug表達(dá)GFP的ProGreen™桿狀病毒表達(dá)載體(AB Vector)和0.1 µg的pVL1393 轉(zhuǎn)移載體(AB Vector). (A)轉(zhuǎn)染后6天使用Zeiss S100熒光顯微鏡拍攝熒光和相位對(duì)比圖像。(B) Merge
圖2. TransIT®-Insect的性能優(yōu)于競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的轉(zhuǎn)染試劑。昆蟲細(xì)胞系(A)Sf9,(B)High Five™, 和(C)果蠅S2細(xì)胞,在96孔板中用0.1µg由hr5增強(qiáng)子/IE1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染,使用zhiding試劑以zhiding試劑與DNA的比例(µl:µg)轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)測(cè)量螢光素酶的表達(dá)。Sf9和High Five™在無(wú)血
★ 桿狀病毒產(chǎn)量高—昆蟲細(xì)胞中表達(dá)桿狀病毒的理想選擇
圖3. 使用TransIT®-Insect在High Five中的高效表達(dá)重組蛋白 。在6孔板中用2.5µg由hr5增強(qiáng)子/IE1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)High Five™ 細(xì)胞(Thermo Fisher Scientific) 。從轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的細(xì)胞制備總可溶性細(xì)胞裂解物。通過(guò)SDS-PAGE和考馬斯藍(lán)染色分析來(lái)自100µl培養(yǎng)物的裂解物;cells alone(未轉(zhuǎn)
圖4. 使用TransIT®-Insect高效表達(dá)蛋白。昆蟲細(xì)胞系(A) Sf9,(B) High Five™和(C)果蠅S2在96孔板中轉(zhuǎn)染 0.1 ug的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒的比例為2:1。在轉(zhuǎn)染后24、48和72小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)熒光素酶的表達(dá)。Sf9和High Five™細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染;S2細(xì)胞置于含血清的培養(yǎng)基中。
★血清兼容—無(wú)動(dòng)物來(lái)源的非脂質(zhì)體配方,
★性價(jià)比高—每次轉(zhuǎn)染所需的試劑量較低
產(chǎn)品信息:
Mirus 特色轉(zhuǎn)染試劑
·TransIT®-Insect Transfection Reagent 昆蟲細(xì)胞專用轉(zhuǎn)染試劑,用于制備高滴度桿狀病毒
貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
MIR 6104 | TransIT®-Insect Transfection Reagent | 0.4 ml |
MIR 6100 | TransIT®-Insect Transfection Reagent | 1 ml |
MIR 6105 | TransIT®-Insect Transfection Reagent | 5×1ml |
MIR 6106 | TransIT®-Insect Transfection Reagent | 10×1 ml |
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和重組桿狀病毒制備是昆蟲細(xì)胞表達(dá)常用方法,TransIT®-Insect 是一款專用于多種昆蟲細(xì)胞系的高效 DNA 轉(zhuǎn)染試劑。
部分應(yīng)用文獻(xiàn)展示:
#1:Establishment of a Pseudovirus Platform for Neuraminidase Inhibiting Antibody Analysis.International Journal of Molecular Sciences (2023) 24:2376
Cell line:sf21
#2:MicroRNA miR-274-5p Controls Melanotic Mass Formation and Developmental Growth by Regulating the Found-in-Neurons-JNK Signaling Axis in Drosophila.Preprints (2023).
Cell Type: S2
#3:Baculovirus actin-based motility drives nuclear envelope disruption and nuclear egress.Current Biology (2018).
Cell line : High Five
#4:miR-34-5p, encoded by Spodoptera frugiperda, participates in anti-baculovirus by regulating innate immunity in the insect host.International Journal of Biological Macromolecules (2022) 222:2190
Cell Type: S9
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