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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時熒光pcr試劑盒 |
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RIPA裂解液（弱）
| 參考價 | ￥ 226 |
| 訂貨量 | 1 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-07-24 13:54:07瀏覽次數(shù)：267
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- RIPA裂解液(弱)使用方法:
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 取適當(dāng)量的 RIPA 裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（貨號 WB0114），使 PMSF 的終
濃度為 1mM。
2. 對于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍，加入適量裂解液，用槍吹打
數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸，輕輕的搖晃約 5-10 分鐘，充分裂解后，10000-14000g 離心 10 分鐘，
取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。
裂解液用量說明： 用于不同規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)板裂解液容量
板規(guī)格/表面積 試劑容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍，加入適量裂解液，用槍
吹打把細(xì)胞吹散，用手指輕彈或旋渦震蕩 5-10 分鐘以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞
沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解，充分裂解后，10000-14000g 離心 10 分鐘，取上清，
即可進(jìn)行后續(xù)操作。
RIPA裂解液(弱)對于組織樣品：
1.手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成
幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2. 取適當(dāng)量的 RIPA 裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿(如果裂解不充分可
以適當(dāng)添加更多的裂解液 如果需要高濃度的蛋白樣品 可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。
4. 用勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3- 5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)作。
注：RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基
因組 DNA 等的復(fù)合物。
