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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價(jià) | ￥ 86 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2019-06-06 13:36:42瀏覽次數(shù)：448
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AHH-1人外周血額B淋巴細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
AHH-1人外周血額B淋巴細(xì)胞常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：
1、觀察細(xì)胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細(xì)胞密度；觀察細(xì)胞形態(tài)請(qǐng)用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2、瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；
3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶?jī)?nèi)；
4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污染，請(qǐng)及時(shí)與我們。
5、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。
6、細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時(shí)后觀察，
7、如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 85-95%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁， 將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我 們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。
8、細(xì)胞消化鋪板，細(xì)胞死亡較多。 *消化時(shí)間掌控好切勿消化過(guò)度，第二終止要*（以T25瓶為例，加1ml胰酶用5ml*培養(yǎng)基終止），第三控制吹打次數(shù)和力度，避免損傷。
我公司代理銷售ATCC來(lái)源，sciencell來(lái)源，上海細(xì)胞庫(kù)來(lái)源等細(xì)胞銷售，另我公司有自建細(xì)胞庫(kù)，生產(chǎn)培養(yǎng)各類細(xì)胞系，采用灌注法制備各種原代細(xì)胞。
