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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 86 |
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更新時間：2019-06-06 12:00:20瀏覽次數：693
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HCCLM6人肝癌細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
HCCLM6人肝癌細胞常見問題及解決方法：
1、觀察細胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀察細胞形態(tài)請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2、瓶中運輸的培養(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；
3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內；
4、收到細胞后，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們。
5、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
6、細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時后觀察，
7、如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 85-95%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁， 將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我 們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。
8、細胞消化鋪板，細胞死亡較多。 *消化時間掌控好切勿消化過度，第二終止要*（以T25瓶為例，加1ml胰酶用5ml*培養(yǎng)基終止），第三控制吹打次數和力度，避免損傷。
我公司代理銷售ATCC來源，sciencell來源，上海細胞庫來源等細胞銷售，另我公司有自建細胞庫，生產培養(yǎng)各類細胞系，采用灌注法制備各種原代細胞。
