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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
2024-7-27 閱讀(60)
郁 金 香 碎 色 病 毒
探 針 法 熒 光 定 量 RT- PCR 試 劑 盒
Tu lip b reaki ng Pot y vi rus P ro be RT - q P C R K it產(chǎn)品及特點(diǎn)
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2. 引物等組分經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)郁金香碎色病毒 RNA 序列高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他 病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為 5 個(gè) 數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
| 2 × OneStep Probe Mix | 021101a | 550 μl |
| OneStep Probe Enzyme Mix | 021102b | 55 μl |
| DEPC-H2O | 070401 | 1 ml |
| 熒光模板稀釋液 | 070407 | 1 ml |
| 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探針混合液 | 1525190yp | 210 μl |
| 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 1525190pc | 50 μl |
保存條件
郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
使用方法
一、RNA 提取(樣本制備區(qū))
用自選方法提取純化樣品 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。建 議使用病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒（Cat:GZ010702-50）提取 RNA。
二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘， 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。
三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
若有 N 個(gè)待檢樣品，準(zhǔn)備 N+2 個(gè) qPCR 管(N 個(gè)待檢樣品+1個(gè)陰性對照+6 個(gè)陽性對 照) ，向各 qPCR 管中分別加入下列成分。
| 成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | qPCR 陰性對照 | qPCR 陽性對照 |
| 2 × OneStep Probe Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| OneStep Probe Enzyme Mix | 各 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探針 混合液 | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)。
四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 μl 模板，順序?yàn)殛幮詫φ眨―EPC-H2O）、待測樣品模板、 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
五、擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴(kuò)增儀器樣品槽相應(yīng)位置，進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：
| 過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 20 min |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
| qPCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 20 sec | |
| 信號通道 | FAM 通道采集熒光信號 | |
六、結(jié)果分析
1. 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，推算出 其濃度。
2. 如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果：
陽性對照（1×10E5 拷貝/μL）結(jié)果：Ct 值<30 ，有明顯指數(shù)增長，呈典型的 S 型曲 線。
陰性對照結(jié)果：Ct 值>40 或無 Ct 值，無明顯指數(shù)增長期和平臺期。
樣本檢測結(jié)果：Ct 值<38 ，有明顯指數(shù)增長，表明樣本中檢測出該病毒，結(jié)果為陽 性；Ct 值>40 或無 Ct 值，表明樣本中未檢測出該病毒，結(jié)果為陰性；Ct 值在38-40 范 圍，應(yīng)對樣本進(jìn)行復(fù)檢，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Ct 值仍在 38-40 范圍，有明顯指數(shù)增長，則判 定為陽性，否則為陰性。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 |
| 010702-50 | 病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒（離心柱型） |
| 020701-1 | 2 ×Probe qPCR Mix |
| 020801-1 | 2×SYBR qPCR Mix |
郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
