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Trizol（總RNA提取試劑）

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更新時間：2019-01-11 11:51:34瀏覽次數(shù)：4630次

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上海通蔚生物有限公司

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產(chǎn)品簡介

Trizol（總RNA提取試劑）為客戶供應(yīng)*貼心的服務(wù)，與每一位顧客建立良好的合作關(guān)系，通過不定期進行回訪，經(jīng)過不斷的實驗優(yōu)化和改進，積累大量的經(jīng)驗，力求做到更好！

詳細(xì)介紹

Trizol(總RNA提取試劑)產(chǎn)品簡介：

Trizol是一種新型的用于細(xì)胞或組織的總RNA提取試劑，Leagene Trizol采用與Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其顏色、抽提的方法和步驟與后者*相同。Leagene Trizol含酚和異硫酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶，保持RNA的完整性。加入并離心后，溶液形成上清層為水相(無色)、中間層、下層為有機相(紅色)。上清層用沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA，下層用沉淀回收蛋白。

Trizol適用于從各種組織或細(xì)胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100 mg組織、5×106細(xì)胞)，也可用于大量樣品(>1g組織/>107細(xì)胞)。提取的總RNA質(zhì)量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆。本產(chǎn)品具有以下特點：①適用范圍廣；②操作簡單，整個過程1小時內(nèi)完成；③純度高；④污染少。

Trizol(總RNA提取試劑)操作步驟(僅供參考)：

樣品準(zhǔn)備

⑴貼壁細(xì)胞：

①直接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Trizol裂解細(xì)胞，每10cm2面積加1ml Trizol，用移液器吹打混勻。

②*消化：用無菌PBS洗滌細(xì)胞后，加入含有0.05～0.25%*的PBS處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中，5000～6000g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，去除上清。收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則裂解不*，降低RNA收獲率。

⑵懸浮細(xì)胞：無需清洗細(xì)胞，直接5000～6000 g離心5 min，收集細(xì)胞。每5×106～107動物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml Trizol。

⑶組織：取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織，50～100mg組織在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過Trizol體積的10%。研磨要迅速，以1min為佳。

⑷血液：取0.5～1 ml新鮮或凍存的血液，12000g離心5 min，去除血漿，加入1ml Trizol，充分振蕩混勻。

核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存5～10 min后，充分振蕩，反復(fù)1～3次)，將裂解樣品或勻漿液室溫放置5～10 min，使核蛋白與核酸*分離。

樣品分層：加入0.2 ml/1ml Trizol，劇烈振蕩15 s，室溫放置2～3 min。置于4℃離心機，12000 g離心10～15 min。上層為水相，中間層和下層為有機相，RNA在上層水相。

沉淀RNA：吸取上層水相(約500μl)轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會有染色體DNA污染)，加入等體積混勻(或者加入1.2倍體積Leagene TrizolRNA沉淀液，超低溫冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室溫放置15～20 min。12000 g 4℃離心10 min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀，棄上清。

洗滌RNA：加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Trizol洗滌沉淀(或者加入1ml Leagene TrizolRNA洗滌液，可以大大提高RNA純度），室溫放置5～10 min，7500g 4℃離心5 min，棄上清。室溫干燥5～10 min，不宜過分干燥，否則RNA難以溶解。

溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃*保存或直接用于后續(xù)試驗。對于肝、胰腺、腎等組織中RNase含量高的樣品，沉淀時用*去離子甲酰胺溶解。

分析與定量：

測定樣品在260 nm和280 nm的吸收值確定RNA的質(zhì)量。按1OD=40pg RNA計算RNA的產(chǎn)率。OD260/280在1.8～2.0視為抽提RNA純度較好。濃度在4μg/ml以上的樣品適于用分光光度計測定。

進行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和污染情況。

核酸分析儀測定RNA的質(zhì)量和純度。

Trizol(總RNA提取試劑)注意事項：

1、樣品保存：加入Trizol混勻后，樣品可在-70℃放置1～2月；RNA樣品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要*保存，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。

2、 Trizol是強腐蝕性物質(zhì)，污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助。

3、 Trizol可常溫運輸，建議保存4℃保存。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。