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ELISA試劑盒試驗競賽法的操作過程

閱讀:275發(fā)布時間:2019-6-14

ELISA試劑盒抗原材猜中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原結(jié)合。標本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反響呈色淺于陰性反響。
ELISA試劑盒競賽法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競賽與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。

操作ELISA試劑盒過程如下:
1.Elisa試劑盒試驗中將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗刷。

2.待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反響。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順暢地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的時機與固相抗體結(jié)合,競賽性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的時機,使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達充沛的量 

3.加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標抗原多,故色彩深。參考管色彩深度與待測管色彩深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管色彩越淡,表示標本中抗原含量越多。一般狀況,是通過方波伏安法,檢測培育系統(tǒng)的峰電流,通過峰電流與抗原抗體的線性關(guān)系來確定系統(tǒng)的檢測目標的濃度。 

另一種模式為將標本與抗原一同參加到固相抗體中進行競賽結(jié)合,洗刷后再參加酶標抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反響??笻Be的檢測一般選用此法。 


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