E.coli DNA聚合酶 Ι

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更新時間：2018-06-19 16:03:14瀏覽次數(shù)：846次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

E.coli DNA聚合酶 Ι大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ（DNA polymeraseⅠ，DNA polⅠ），1956年由Arthur Kornberg首先發(fā)現(xiàn)的DNA聚合酶，又稱Kornber酶。純化的DNA polⅠ由一條多肽鏈組成，約含1000個氨基酸殘基，分子量為109KD。含有一個二硫鍵和一個-SH基。它具有下列特點：
1. 除具有5'→3'DNA聚合酶功能，還具有5'→3'外切酶活性，3'

詳細介紹

E.coli DNA聚合酶 Ι

名稱	規(guī)格	價格	手冊
E.coli DNA聚合酶 Ι	500U	詢價

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ(DNA polymeraseⅠ，DNA polⅠ)，1956年由Arthur Kornberg首先發(fā)現(xiàn)的DNA聚合酶，又稱Kornber酶。純化的DNA polⅠ由一條多肽鏈組成，約含1000個氨基酸殘基，分子量為109KD。含有一個二硫鍵和一個-SH基。它具有下列特點：
1. 除具有5'→3'DNA聚合酶功能，還具有5'→3'外切酶活性，3'→5'外切酶活性，焦磷酸解作用和焦磷酸交換作用。
2. 可應用于切口平移(NiE.coli DNA聚合酶 Ιck-translation)和cDNA第二鏈合成。
3. 本品不含 DNase I，因此切刻平移反應時需額外添加 DNase I。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，E.coli DNA聚合酶 Ι離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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