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鏈脲佐菌素溶液,10mg/mL

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鏈脲佐菌素溶液,10mg/mL鏈脲佐菌素,又稱鏈脲菌素；N-（Methylnitrosocarbamoyl） -α-D-glucosamine；STZ）,分子式：C8H15N3O7，分子量：265.22，CAS號(hào)：18883-66-4。鏈脲佐菌素是一種氨基葡萄糖-亞硝基脲，是一種DNA烷基化試劑，能通過(guò)GLUT2葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT2 glucose trasport protein）獨(dú)自進(jìn)入

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鏈脲佐菌素溶液,10mg/mL

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鏈脲佐菌素,又稱鏈脲菌素；N-(Methylnitrosocarbamoyl) -α-D-glucosamine；STZ）,分子式：C8H15N3O7，分子量：265.22，CAS號(hào)：18883-66-4。鏈脲佐菌素是一種氨基葡萄糖-亞硝基脲，是一種DNA烷基化試劑，能通過(guò)GLUT2葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT2 glucose trasport protein）獨(dú)自進(jìn)入細(xì)胞，可以對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能產(chǎn)生糖尿病，用于建立糖尿病模型。STZ 需要用檸檬酸和檸檬酸鈉配制而成的pH4.2緩沖液配制，本產(chǎn)品濃度為10mg/mL的鏈脲佐菌素溶液。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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