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放線菌素D溶液,1mg/mL

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放線菌素D溶液,1mg/mL放線菌素D（更生霉素；Cosmegen、Meractinomycin）,分子式為C62H86N12O16，分子量：1255.41?？勺鳛榇x抑制劑，細(xì)胞質(zhì)膜研究。它能抑制RNA的合成，作用于mRNA，干擾細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過程，阻止蛋白質(zhì)的合成。吞食有*毒性。本品為濃度為1mg/mL DMSO溶液。放線菌素D分子中含有一個(gè)苯氧環(huán)結(jié)構(gòu)，通過它連接兩個(gè)等位的環(huán)狀肽鏈。此肽鏈可與D

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放線菌素D溶液,1mg/mL

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放線菌素D溶液,1mg/mL

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放線菌素D（更生霉素；Cosmegen、Meractinomycin）,分子式為C62H86N12O16，分子量：1255.41?？勺鳛榇x抑制劑，細(xì)胞質(zhì)膜研究。它能抑制RNA的合成，作用于mRNA，干擾細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過程，阻止蛋白質(zhì)的合成。吞食有*毒性。本品為濃度為1mg/mL DMSO溶液。放線菌素D分子中含有一個(gè)苯氧環(huán)結(jié)構(gòu)，通過它連接兩個(gè)等位的環(huán)狀肽鏈。此肽鏈可與DNA分子的脫氧鳥嘌呤發(fā)揮特異性相互作用，使dactinomycin D嵌入DNA雙螺旋的小溝中，與DNA形成復(fù)合體，阻礙RNA多聚酶的功能，抑制RNA的合成，特別是mRNA的合成。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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