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PCRLIC克隆套裝

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更新時間：2018-06-14 13:05:36瀏覽次數(shù)：321次

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產(chǎn)品簡介

PCRLIC克隆套裝LIC就是不依賴于連接的克隆技術(shù)（Ligation-Independent Cloning），它是繼限制性內(nèi)切酶切/連接酶克隆方法后出現(xiàn)的第二代DNA克隆技術(shù)，它效率高，尤其適用于大規(guī)模分子克隆。本產(chǎn)品就是基于LIC原理開發(fā)的即用型克隆載體，它具有下列特點：
1. 操作簡單，一管式一步反應(yīng)，只需加入插入片段即可，客戶不需要購買任何額外的酶。

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PCRLIC克隆套裝

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PCRLIC克隆套裝	1ug	詢價

LIC就是不依賴于連接的克隆技術(shù)（Ligation-Independent Cloning），它是繼限制性內(nèi)切酶切/連接酶克隆方法后出現(xiàn)的第二代DNA克隆技術(shù)，它效率高，尤其適用于大規(guī)模分子克隆。本產(chǎn)品就是基于LIC原理開發(fā)的即用型克隆載體，它具有下列特點：

1. 操作簡單，一管式一步反應(yīng)，只需加入插入片段即可，客戶不需要購買任何額外的酶。

2. 時間短，整個過程只要5分鐘即可完成。

3. 高效，比常用的AT克隆效率更高，陽性率接近于100%。

4. 克隆方向和位置精準和可控，適合表達型克隆工作。

5. 便于自動化，適合高通量克隆。

6. 適用于長片段克隆。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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