miRNA熒光定量檢測試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
miRNA熒光定量檢測試劑盒 | 25次 | 詢價 | |
本試劑盒采用 SYBR Green I 嵌合熒光染料法的原理來進行miRNA熒光定量PCR檢測。本產(chǎn)品是專門為miRNA定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR檢測試劑。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強劑等所有PCR所需要的成分;所含的熒光染料SYBR Green I 可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合,使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針;其中的Taq DNA polymerase是經(jīng)化學(xué)修飾的高效熱啟動酶,配合*的緩沖體系,使反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內(nèi)對miRNA進行準(zhǔn)確定量。它具有下列特點:
1. 簡便、快捷完成miRNA的提取與檢測。
2. 檢測通量高,只需少的RNA樣本,即可同時進行多種目標(biāo)miRNA的檢測。
3. 檢測特異性好,*的miRNA引物設(shè)計技術(shù)及其優(yōu)化的反應(yīng)體系避免了非特異
性擴增、特別是Pre-miRNA的污染 。
4. 檢測分辨率高:該系統(tǒng)能分辨單堿基差異的miRNA。
5. 檢測靈敏度高:可在低至pg級的總RNA中檢測到特異表達的miRNA。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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