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即用型高保真PCR試劑盒

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即用型高保真PCR試劑盒本產(chǎn)品是即用型的高保真PCR試劑盒，含有除引物、模板以外的所有高保真PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應(yīng)。
1. 高保真：所含Pfu DNA聚合酶是使用較廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。

詳細(xì)介紹

即用型高保真PCR試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
即用型高保真PCR試劑盒	11.5 mL	150元

本產(chǎn)品是即用型的高保真PCR試劑盒，含有除引物、模板以外的所有高保真PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應(yīng)。

1. 高保真：所含Pfu DNA聚合酶是使用廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。

2. 使用時(shí)只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，非常方便，簡(jiǎn)化了高保真PCR的準(zhǔn)備工作。

3. 高保真PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實(shí)驗(yàn)誤差。

4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。

5. 可用于基因的高保真擴(kuò)增和基因定點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)，得到的高保真PCR產(chǎn)物可用于平末端克隆。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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